Kharakteristika progenitornykh kletok epikarda iz neonatal'nykh serdets myshi

Abstract

Full Text

Клетки эпикарда принимают активное участие в эмбриональном развитии сердца и его репарации при повреждении, что делает эпикард потенциальной мишенью для лечения заболеваний, а клетки эпикарда перспективным инструментом клеточной терапии. Способность клеток эпикарда вступать в эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) с последующей дифференцироваться в клетки сосудов и фибробласты позволяет рассматривать его в качестве клеточной ниши прогениторных клеток эпикарда. В связи с этим разработка методов получения этого типа клеток и изучение механизмов регуляции их функций является важнейшей задачей регенеративной медицины. Цель исследования: разработать метод получения и охарактеризовать свойства полученных клеток эпикарда. Методы. В работе использованы сердца неонатальных мышей линии C57Bl6. Диссоциация клеток эпикарда проводилась с помощью 0,25% раствора трипсина (5 мин. ). Культивирование клеток эпикарда проводили с среде IMDM, содержащей глутамин, 1% фетальной сыворотки теленка (embryonic cell grade), 1 % пенициллин-стрептомицина, 2-меркаптоэтанола. Пролиферацию клеток оценивали с помощью МТТ теста, иммунофенотип - с помощью иммуноцитохимии. Результаты. Показано, что кратковременная обработка неонатальных сердец мыши ферментативным раствором трипсина способствует диссоциации мезо-телиального слоя клеток, что позволяет получить культуру прогениторных клеток эпикарда (ПКЭ) in vitro. ПКЭ имеют «cobblestone» морфологию, сохраняют плотные (ZO1+) контакты и характеризуются экспрессией эпи-кардиальных маркеров (Wt1, POD1, TBX18). При культивировании в условиях низкой плотности они спонтанно вступают в ЭМП, теряют плотные контакты и приобретают веретенообразную форму. При этом часть клеток приобретает маркеры фибробластов (виментин, CD90, FSP1) и гладкомышечных клеток (a-гладкомышечный актин, калпонин). Культивирование в присутствии рекомбинантных факторов роста (SCF или PDGF bb) достоверно увеличивает пролиферативную активность ПКЭ. Таким образом, кратковременная обработка неонатальных сердец мыши раствором трипсина способствует получению культуры ПКЭ in vitro, которая сохраняет соответствующую морфологию, иммунофенотип, способность вступать в ЭМП и трансформироваться в гладкомышечные клетки и фибробласты. Действие SCF и PDGF bb активирует пролиферативную активность ПКЭ, что может указывать на их роль в качестве активаторов эпикарда в процессе репарации сердца.