Issledovanie znachimosti markera CD133 v proliferativnom potentsiale kletok glioblastomy i poisk putey upravleniya proliferatsiey i differentsirovkoy etikh kletok

Abstract

Full Text

Глиобластома - злокачественная первичная опухоль головного мозга, которая является неизлечимой на данный момент времени и поэтому требует особенного внимания со стороны исследователей. Перспективным направлением является применение клеточных и молекулярно-генетических методов. Целью работы является изучение роли поверхностного маркера CD1 33 клеток глиобластомы человека в их пролиферативном потенциале и исследование возможности управления пролиферацией и дифференцировкой этих клеток. Материалы и методы. В эксперименте использовались частично перевиваемые культуры, полученные из клеток глиобластомы человека (5 образцов) по разработанной в лаборатории методике. Для RT-PCR использовали панель, состоящую из онкомаркеров (CDk4, CDk6, EGFR, FGFR, FSHR, MAP2, MDM2, MELK, Olig2, PDGF, PDGFR) и маркеров стволовости (bIII-tubulin, Nestin, Nanog, Notch2, Oct4, SOX2). Клетки в культурах проходили 5 пассажей, после чего они криоконсервировались. С целью остановки разрастания опухоли на клеточные культуры глиобластомы человека одновременно воздействовали блокаторами пролиферации (смесь аптамеров VEGF, as1411 и r-21) и индукторами нейральной диф-ференцировки (ретиноевая кислота (RA), интерлейкин 6 (IL6), GdNf). Культуры исследовали на 10 (RT-PCR, MTT-тест) и 20 день (MTT-тест) после воздействия дифферен-цировочного фактора. Результаты. При проведении анализа экспрессии маркера CD1 33, характерного и нормальным, и опухолевым стволовым клеткам, обнаружено, что в образце Г2 экспрессия CD133 была повышена. При использовании смеси аптамеров и IL6 наблюдалось значительное снижение пролиферации до 25%, при этом увеличивалась экспрессия PDGFRa. Все три комбинации снижают экспрессию CDk6, EGFR и повышают экспрессию CDk4, PDGFB. Комбинации RA с IL6 снижают экспрессию FSHR. При использовании всех комбинаций увеличивалась экспрессия GFAP и bIII-tubulin, снижалась экспрессия Oct4, что говорит о вероятности сдвига состояния клеток в сторону нейральной дифференцировки. При использовании аптамеров с IL6 снижалась экспрессия CD133, что не наблюдалось в других случае. Выводы. Полученные данные говорят о возможности управления пролиферативным и дифференциальным потенциалом опухолевых клеток глиобастомы. Можно утверждать, опираясь на этот эксперимент, что комбинация антипролиферативных аптамеров и IL6 может быть эффективна для снижения пролиферации опухолевых клеток глиобластомы человека. Планируется проведение экспериментов с СD133+ и СD133- культурами клеток глиобластомы человека.