Vliyanie ekzogennykh i endogennykh faktorov na ekspressiyu VEGF v kul'tiviruemykh in vitro mezenkhimnykh stvolovykh kletkakh cheloveka

Abstract

Full Text

Мезенхимные стволовые клетки (МСК) выделены из различных тканей организма и находят широкое применение в клинической практике. В настоящее время накапливаются доказательства того, что терапевтический эффект МСК обеспечивается за счет их способности взаимодействовать с другими клетками посредством секреции паракринных факторов. Одним из важнейших факторов, обладающим ангиогенным, трофическим и ан-тиапоптотическим действием, является эндотелиальный фактора роста сосудов (VEGF). Показано, что МСК, секре-тирующие VEGF, оказывают терапевтический эффект. Целью работы было сравнить базальный и индуцированный уровень экспрессии VEGF в МСК и выяснить возможные механизмы изменения уровня секреции VEGF при культивировании in vitro. Использовали МСК, выделенные из менструальной крови 3-х здоровых доноров. Показано, что МСК от разных доноров различаются по базальному уровню секреции VEGF. При монослойном 2D культивировании секреция VEGF быстро снижается. Культивирование МСК даже на поздних пассажах в виде сфероидов значительно увеличивало секрецию VEGF. Повышенный уровень секреции сопровождался усилением экспрессии мРНК VEGF и транскрипционного фактора HIF-1 в сфероидах. Проверяли действие экзогенных ростовых факторов TGFp, VEGF и факторов сыворотки крови на секрецию VEGF и жизнеспособность МСК. Показали, что TGFp (0,1 нг/мл) увеличивал секрецию и жизнеспособность 2D культур, что сопровождалось увеличением количества a-sma позитивных МСК. Экзогенный VEGF (10 нг/ мл) увеличивал жизнеспособность 3D культур МСК, что сопровождалось появлением CD309 (рецептор VEGFR2) позитивных клеток. Снижение концентрации сыворотки до 1% в течение 7 дней не влияло на уровень секреции VEGF в МСК, но снижало жизнеспособность клеток в сфероидах. Противоопухолевый препарат док-сорубицин незначительно повышал секрецию VEGF в 2D культурах МСК и не влиял на секрецию в сфероидах. Рекомбинантный VEGF улучшал жизнеспособность МСК, обработанных доксорубицином. МСК, культивируемые в сфероидах могут быть предпочтительней, чем монослойные для терапевтического ангиогенеза, так как под действием эндогенных факторов секреция VEGF в них выше и стабильнее. Однако у пациентов с опухолевыми заболеваниями индукция VEGF может играть негативную роль, вызывая неоваскуляри-зацию опухолей.