Analiz vzaimodeystviya i ustoychivosti k tsisplatinu opukholevykh, immunnykh i stromal'nykh kletok v ko-kul'ture

Abstract

Full Text

Одной из актуальных проблем доклинического скрининга является создание тест-систем для высокопроизводительного скрининга противоопухолевых препаратов. В настоящем исследовании смоделированы две разновидности ко-культуры, содержащие два типа клеток (опухолевые и стромальные клетки) и ко-культуру, содержащую три типа клеток (опухолевые, стромальные и иммунные клетки), изучили межклеточное взаимодействие, а также устойчивость ко-культур к противоопухолевому препарату. Материалы и методы. Для создания ко-культуры предварительно окрашенные витальными красителями Vybrant Cell-Labeling Solution (Thermo Fisher Scientific Inc., США) клетки нейробластомы SH-SY5Y и полученные из костного мозга мезенхимальные стволовые клетки (КМ-МСК) смешивали в соотношении 1:1 в двойной совместной культуре, в тройной совместной культуре SH-SY5Y, КМ-МСК и мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) смешивали в соотношении 1 :1 :1 . Флуоресцентную микроскопию проводили на инвертированном микроскопе AxioObserver.Z1. Цитофлуориметрический анализ проводили на приборе FACS Aria III (BD Biosciences, США). Уровень экспрессии мРНК Bcl-2, Cav^, Cav1p, Rac1 определяли методом количественной ПЦР, приняв 18S рРНК в качестве эталонного гена. Уровень секреции цитокинов/хемокинов клеток анализировали с помощью панели Bio-Plex Pro™ Human Chemokine 40-plex Panel (Bio-Rad, США). Результаты и обсуждение. При помощи флуоресцентной микроскопии и проточной цитофлуориметрии показано, что клетки в ко-культурах активно взаимодействуют друг с другом, формируя межклеточные контакты и активно обмениваясь мембранными компонентами в процессе самоорганизации. МТТ-анализ показал ингибирующее влияние цисплатина (10 мкг/ мл) на пролиферацию SH-SY5Yв монокультуре и меньшее ингибирующее влияние на пролиферативную активность клеток в ко-культурах. Данные ПЦР показали, что уровень экспрессии Bcl-2, Cav^, Cav1p, Rac1 вSH-SY5Yзначительно изменялся в тройных и двойных ко-культурах, включая экспериментальные группы после обработки цисплатином. Анализ цитокинового профиля показал значительные изменения концентрации цитокинов IL-6, IL-8, MCP-1 ,ENA-78, Gro-a, через 24, 48 и 72 часа культивирования. В целом, представленные результаты подтверждают тезис о влиянии стро-мальных и иммунных клеток на злокачественные процессы, такие как поддержка роста опухоли, развитие лекарственной устойчивости и повышение метастатического потенциала в опухоли.