Vliyanie plazmy patsientov s troficheskimi yazvami na funktsii dermal'nykh fibroblastov, mezenkhimal'nykh stvolovykh i endotelial'nykh kletok

Abstract

Full Text

Высокая частота встречаемости трофических язв нижних конечностей, склонность к рецидивам, ухудшение качества жизни, инвалидизация и смертность диктуют поиск новых способов лечения. Обнадеживающие результаты лечения получены при использовании обогащенной тромбоцитами аутологичной плазмы (ПОТ), обусловленные повышенным содержанием ростовых факторов в ней. Однако, влияние плазмы пациентов с трофическими язвами без сахарного диабета и с наличием сахарного диабета (СД) на функциональные свойства клеток, вовлеченных в процесс регенерации трофических язв, исследовано недостаточно. Цель: изучение влияния обогащенной (ПОТ) и обедненной тромбоцитами (ОТП) плазм пациентов с трофическими язвами различного генеза на пролиферацию и миграцию дермальных фибробластов (ДФ) человека, мезенхимальных стволовых клеток костного мозга (МСК) и клеток эндотелиальной линии EA.hy 926 in vitro. ПОТ получали из венозной крови пациентов, центрифугированием в пробирках для плазмолифтинга. ОТП получали осаждением тромбоцитов из ПОТ, затем осадок тромбоцитов в 1 мл плазмы подвергали 2-х кратной заморозке/разморозке, фильтровали. Выделение ДФ из кожи доноров и МСК костного мозга проводили по стандартной методике. В МТТ-тесте показали, что ПОТ и ОТП пациентов с трофическими язвами нижних конечностей без СД значимо стимулирует пролиферацию ДФ, МСК и EA.hy 926 в сравнении с контролем (10% ЭТС) и плазмами пациентов на фоне СД (p<0,05). Плазмы пациентов с трофическими язвами на фоне СД подавляют пролиферацию этих же клеток в сравнении с контролем и пациентами без СД (p<0,05). Исследование пролиферации и миграции ДФ на приборе xCELLigence показало, что ОТП пациентов с трофическими язвами, особенно на фоне СД, значимо снижали пролиферацию ДФ в сравнении с контролем (p<0,05). В тоже время, ПОТ пациентов с трофическими язвами, особенно без СД, значимо стимулирует пролиферацию ДФ в сравнении с контролем (p<0,05). В отношении миграции ДФ показано, что ПОТ, как на фоне СД, так и без, значимо увеличивает миграционный потенциал клеток в сравнении с контролем (p<0,05). Более того, ОТП пациентов с СД значимо стимулирует миграцию ДФ в сравнении с контролем (p<0,05). Таким образом, плазма пациентов с трофическими язвами на фоне сахарного диабета проявляет ингибирующее влияние на функциональную активность ДФ, МСК костного мозга человека и клетки эндотелиальной линии EA.hy 926, а плазма пациентов с трофическими язвами без сахарного диабета стимулирует функциональную активность этих клеток.