THE EFFECT OF SET7/9 INHIBITION IN VITRO ON THE LEVEL OF EXPRESSION OF INFLUENZA A VIRUS PROTEINS

Abstract

Full Text

Транскрипционный фактор NF-kB играет ведущую роль в формировании врожденного иммунного ответа, в частности, при инфекции вируса гриппа. При его участии ценой гибели инфицированных клеток ограничивается репродукция вируса. С другой стороны, активация NF-kB выгодна вирусу и необходима для продукции вирусного потомства. Поскольку одним из этапов активации NF-kB является метилирование RelA/p65 лизинметилтрансфера-зой SET7/9 (ЛМТ), мы считаем, что ЛМТ может влиять на экспрессию вирусных белков. Мы оценивали уровни экспрессии нуклеопротеина (NP) и гемагглютинина (HA) вируса гриппа в различных клеточных линиях карциномы легкого человека. Работа проводилась in vitro в культурах клеток А549 и H-1299, интактных и трансфецированных плазмидой pRc/CMV-RELA для получения сверхэкспрессии p65. Клетки инфицировали штаммами вируса гриппа А: A/PuertoRico/8/34(H1N1) и A/Kurgan/5/05 (H5N2). К клеткам А549 добавляли синтетический ингибитор Set7/9 (R) -PFI-2, после чего их заражали вирусом гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) в дозах 1 - 106 TCID50. Клетки H-1299, интактные и с повышенной экспрессией p65, заражали вирусом гриппа A/Kurgan/5/05. Через 72 часа оценивали в них содержание гемагглютинина (HA) нуклеопротеина (NP) при помощи метода микро-культурального ИФА (м-ИФА). Результаты. Мы наблюдали снижение продукции белка NP на один порядок при инфицировании клеток Н-1299/ pRc/CMV-RELA. HA в этих же клетках накапливалось на 2 порядка больше, чем в интактной культуре Н-1299. Ингибирование SET7/9 приводило к повышению продукции NP в 2-5 раз в клетках А549, инфицированных дозами вируса 1, 10 и 100 TCD50, по сравнению с контролем. При заражении другими инфекционными дозами вируса гриппа подобный эффект не наблюдался. Продукция гемагглютинина при заражении клеток инфекционными дозами вируса гриппа 1-10 TCD50, напротив, снижалась при ингибировании SET7/9 по сравнению с контролем в 1,7-5 раз. Однако в клетках, инфицированных более высокими дозами вируса, экспрессия НА повышалась и в контрольных, и в обработанных ингибитором (R)-PFI-2 клетках. Обсуждение: Поскольку мы наблюдаем схожую репродукцию белка NP вируса гриппа в интактных клетках H-1299 и клетках А549 с ингибитором SET7/9, то можно предположить, что они непосредственно взаимодействуют между собой при вирусной инфекции. Поскольку субъединица p65 является непосредственной участницей действия NF-kB фактора, то схожесть полученных данных может указывать на влияние ЛМТ SET7/9 на активацию NF-kB при гриппозной инфекции.