Proliferatsiya i differentsirovochnyy potentsial mezenkhimnykh stvolovykh kletok krolika v prisutstvii FGF

Abstract

Full Text

Наиболее перспективным объектом тканевой инженерии являются мезенхимные стволовые клетки (МСК) в связи с их мультипотентностью и возможностью получения из аутологичных источников (Г.Ю. Косовский, 2007). Одной из проблем клеточной биотехнологии является разработка методов культивирования МСК в условиях, не оказывающих негативного влияния на биологические характеристики клеток этого типа и способствующих повышению терапевтического потенциала МСК. Мы провели сравнительный анализ пролиферативно-го и дифференцировочного потенциала МСК в культуре в условиях присутствия или отсутствия в культуральной среде FGF (Fibroblast Growing Factor), часто используемого при культивировании МСК для поддержания их физиологических свойств in vitro (А.Г. Полешко и др., 2014). Взаимодействие FGF с рецепторными белками приводит к активации различных путей внутриклеточной сигнализации, связанных с процессами пролиферации, диффе-ренцировки, межклеточными взаимодействиями, прохождением клеток по клеточному циклу. МСК костного мозга (КМ) кролика 3 пассажа выделяли по методу д. б. н. Косовского Г.Ю. (Г.Ю. Косовский, 2009) и культивировали в среде DMEM/F12 (1:1) (ПанЭко, Россия) или Osteogenic Differentiation Medium (ODM) (Biological Industries, США) (поскольку способность к остеогенной дифференцировке in vitro является ключевым параметром, отражающим функциональную активность МСК КМ (Г.Ю. Косовский и др., 2014) с добавлением 1 0% эмбриональной сыворотки коров FBS (HyClonе, США), а также с внесением рекомбинантного FGF человека (Sigma, США) в концентрации 10 нг/ мл среды или без FGF. Популяции МСК условно разделили на 4 группы: клетки 1 группы (контрольной) культивировали в DMEM/F12 без FGF, 2 - в DMEM/F12 с FGF, 3 - в ODM без FGF, 4 - в ODM с FGF. Время культивирования 14 дней. Препараты фиксировали с использованием 4% формалина и 70% этилового спирта и окрашивали ализариновым красным (Sigma, Германия). МСК 1 и 3 группы достигали монослоя на третьи сутки культивирования, тогда как во 2 и 4 группах монослой формировался уже через 24 ч. На 14 сутки, в 1 группе клетки имели преимущественно кубоидальную и полигональную форму, морфологические изменения соответствовали началу остеогенной дифференцировки, тогда как подобные изменения во 2 и 3 группах отмечены на 9 день, а в 4 - на 5. Крупные плотные очаги кальцификации во 2 и 3 группах выявлены на 14 день эксперимента, а в 4 - на 9. Таким образом, рекомбинантный FGF человека способствует пролиферации и остеогенной дифференци-ровке МСК КМ кролика.