Bitsistronnaya geneticheskaya konstruktsiya, kodiruyushchaya mozgovoy neyrotroficheskiy faktor i urokinaznyy aktivator plazminogena, stimuliruet vosstanovlenie povrezhdennogo nerva

Abstract

Full Text

Повреждения периферических нервов являются одной из значимых причин инвалидизации. Недостаточная эффективность существующих терапевтических подходов, актуализирует поиск и создание новых терапевтических подходов и лекарственных препаратов, которые были бы способны поддержать экспрессию нейротрофических факторов на уровне, необходимом для выживания поврежденных нейронов и стимуляции роста нейритов. Несмотря на всю перспективность, применение клеточных препаратов в настоящее время затруднено, что стимулирует предпочтительное развитие генно-терапевтических подходов. В рамках этой концепции нами ранее был создан и исследован генно-терапевтический препарат, содержащего ген мозгового нейротрофического фактора (BDNF). В настоящей работе мы представляем бицистронный невирусный вектор, кодирующий последовательности кДНК двух факторов: BDNF, который стимулирует выживание поврежденных нервных клеток и рост нейритов, и активатора плаз-миногена урокиназного типа (uPA), который способствует очищению области травмы от фибрина, прорастанию нейритов, а также активирует резидентных факторов роста. Биологическая активность полученной генетической конструкции была подтверждена в исследованиях in vitro (стимулировала рост нейритов в культурах нейробластомы Neuro2a и чувствительных ганглиев мыши) и in vivo (на модели травмы периферического нерва). Исследование диссеминации плазмиды из места введения показало, что плазмидная ДНК способна распространяться по организму, особенно после повторных инъекций, однако, эктопической экспрессии закодированных в ней белков обнаружено не было. Исследования острой и хронической токсичности, канцерогенности подтвердили безопасность созданной генетической конструкции, а исследования ее стабильности показали практически полное отсутствие ее деградации в течение двух лет при температуре хранения +4-6°С. Способность влиять на патогенетические звенья процессов реиннервации и нейритогенеза, действенность, безопасность и стабильность - все это делает бицистронную генетическую конструкцию, кодирующую BDNF и uPA, одним перспективных генно-терапевтических препаратов для лечения патологий периферической и центральной нервной системы. Исследование выполнено за счёт гранта Российского фонда фундаментальных исследований - проект № 18015-00535. В работе были использованы коллекции клеток и генетических конструкций, собранных и сохраняемых в рамках проекта «Ноев ковчег», и оборудования, приобретенного за счет средств Программы развития МГУ им. М.В. Ломоносова.