NUCLEOLUS MOVEMENT DYNAMICS AS A PROBE FOR DETECTION OF MICE OOCYTE DEVELOPMENTAL COMPETENCE IN VIVO

Abstract

Full Text

Для оценки степени зрелости ооцитов млекопитающих используются самые разные параметры, как морфологические (размер ооцита, положение зародышевого пузырька, размер перивителлинового пространства, положение ядрышка, распределение хроматина в ядре), так и биохимические (транскрипционная активность ДНК, уровень экспрессии генов, ассоциированных с мейотическим делением и преимплантационным и эмбриональным развитием). Наиболее однозначный и легко определяемый критерий - конфигурация хроматина в ядре. В зависимости от положения и характера конденсации хроматина ооциты подразделяются на 2 основные группы: NSN (от англ. - non-surrounded nucleolus) и SN (от англ. - surrounded nucleolus). NSN конфигурация характеризуется диффузным расположением хроматина в пространстве ядра, высокой транскрипционной активностью. Данными научной литературы подтверждается, что ооциты извлеченные на данной стадии развития завершают мейотическое созревание и могут быть оплодотворены, но развитие зиготы из NSN-ооцита завершается на стадии двух бластомеров. SN конфигурация, напротив, отличается высокой степенью компактизации хроматина; они также успешно завершают мейотическое созревание и зиготы, полученные после оплодотворения in vitro, развиваются до стадии бластоцисты. Таким образом, SN ооциты обладают более высоким потенциалом к развитию. Однако, на практике, для определения конфигурации хроматина в ядре необходимо применять специализированные красители, так или иначе влияющие на организацию хроматина, что совершенно неприемлемо, например, для процедур, связанных с осуществлением ВРТ. Таким образом, чрезвычайно актуален поиск новых малоинвазивных методов для определения потенциала ооцита к развитию. В настоящей работе рассматривается принципиально новый подход к изучению нуклеоплазмы живых GV-ооцитов мышей линии C57Bl/6. В ходе экспериментальной работы мы использовали ядрышко GV-ооцита в качестве «живой» микросферы. При действии оптического захвата ядрышко последовательно смещали, наблюдали за его релаксацией в системе. Нами были выявлены существенные качественные и количественные различия между основными типами ооцитов. Полученные данные смогут в перспективе дополнить существующие морфологические и биохимические критерии, характеризующие разные типы ооцитов, и лечь в основу новых методик по быстрому и малоинвазивному определению потенциала ооцита к развитию.