Razrabotka kletochnykh tekhnologiy dlya regeneratsii sosudov

Abstract

Full Text

Сердечно-сосудистые заболевания продолжают оставаться лидирующей причиной смертности и инва-лидизации людей во всем мире. В данном исследовании в рамках разработки клеточных технологий для регенерации сосудов реализуются два направления: разработка подхода преодоления потенциальной туморогенности делящихся клеток при использовании в заместительной клеточной терапии и получение генетически модифицированных эндотелиальных производных с повышенным ангиогенным потенциалом. В рамках первого направления разработан способ инактивации митотического деления эндотелиальных и гладкомышечных клеток, в результате которого они сохраняют свои морфо-функциональные свойства и ан-гиогенный потенциал in vitro и in vivo. При этом исследование туморогенного потенциала митотически инактивированных клеток на модели иммунодефицитных мышей SCID на протяжении 90 дней не выявило признаков образования опухолей. В рамках второго направления получены линии плю-рипотентных стволовых клеток (ПСК) человека, в которых с помощью метода CRISPR/Cas9 внесена делеция участка гена INT6 - ингибитора фактора, индуцируемого гипоксией, HIF2a. В результате удалось получить ПСК с повышенной экспрессией HIF2a в нормоксических условиях. Полученные генетически модифицированные линии ПСК дифференцировали в эндотелиальном направлении. Делеция INT6 и опосредованное отсутствием ингибитора повышение и стабилизация в нормоксиче-ских условиях HIF2a в ПСК человека привело к повышению эффективности мезодермальной и впоследствии эндотелиальной дифференцировки. В эндотелиальных производных генетически модифицированных ПСК выявлено повышение уровня экспрессии ряда ангиогенных факторов. Оценка ангиогенного потенциала показала, что количество сосудоподобных структур в генетически модифицированных субклонах более, чем в 3 раза превышает значения для контрольных линий. Таким образом, впервые показано, что генетически модифицированные ПСК человека с повышенной экспрессией HIF2a более эффективно дают эндотелиальные производные, обладающие повышенным ангиогенным потенциалом. Оба направления исследований могут стать основой для разработки способов повышения ангиогенного потенциала васкулярных клеток и получения биомедицинских клеточных продуктов, применяемых для регенерации сосудов.