EMPLOYING OF THE HUMAN UMBILICAL CORD BLOOD MONONUCLEAR CELLS OVEREXPRESSING GDNF FOR THE TREATMENT OF APP/PS1 MICE

Abstract

Full Text

Болезнь Альцгеймера (БА) до настоящего момента остается неизлечимым заболеванием. В качестве подхода к лечению нейродегенеративных заболеваний в мире все больше внимания уделяется применению генно-клеточных технологий, позволяющих осуществлять доставку ростовых и трофических факторов в поврежденную ткань. В нашей работе проанализирована эффективность мононуклеарных клеток пуповинной крови человека (МКПК), трансдуцированных аденовирусным вектором, кодирующим глиальный нейротрофический фактор (конструкция МКПК-ad5-GDNF) при лечении БА в модели на APP/PS1 мышах. Были сформированы 4 экспериментальные группы: 1) APP/PS1 мыши после трансплантации конструкции МКПК-ad5-GDNF; 2) APP/PS1 мыши после трансплантации МКПК, экспрессирующих EGFP (МКПК-ad5-EGFP, препарат сравнения); 3) APP/PS1 мыши без лечения; 4) мыши дикого типа. Трансплантацию генноклеточных конструкций осуществляли однократно путем инъекции в ретроорбитальный венозный синус 100 мкл препарата, содержащего 2 млн клеток. Возраст животных был в пределах 11-12 месяцев. Электрофизиологическое исследование продемонстрировало, что у APP/PS1 мышей в возрасте 11 месяцев нет нарушений долговременной потенциации в гиппокампе. При этом пространственная рабочая память у них нарушена: обучаемость в Т-лабиринте составила 15% при обучаемости мышей дикого типа 72,5%. Методом вестерн-блот оценили количество ключевых синаптических белков: синаптофизина и PSD-95. Экспрессия данных белков в гиппокампе APP/PS1 мышей была ниже относительно дикого типа, но отличия не являлись достоверными. Обе генно-клеточные конструкции в равной степени приводили к улучшению памяти: обучаемость в Т-лабиринте увеличивалась до 45% (P<0.05). Трансплантация конструкции МКПК-ad5-GDNF достоверно увеличивала экспрессию синаптофизина и PSD-95 в гиппокампе APP/PS1 мышей. Конструкция МКПК-ad5-EGFP значимого эффекта на экспрессию синаптических белков не оказала. Таким образом: 1) в основе нарушений памяти не обязательно лежит нарушение долговременной потенциа-ции; 2) конструкция МКПК-ad5-GDNF увеличивала синаптическую плотность в гиппокампе APP/PS1 мышей, но не оказывала более выраженного действия на память по сравнению с МКПК-ad5-EGFP.