OBTAINING AND IMMUNOCHEMICAL CHARACTERIZATION OF POLYCLONAL ANTIBODIES TO IRR RECEPTOR TYROSINE KINASE

Abstract

Full Text

Рецептор, подобный инсулиновому рецептору IRR (insulin receptor-related receptor) принадлежит к подсемейству инсулиновых рецепторов [1]. Нами впервые было показано, что IRR является единственной известной на сегодняшний день рецепторной тирозинкиназой - сенсором внеклеточной щелочной среды и участвует в регуляции кислотно-щелочного равновесия в организме. Данный рецептор активируется при защелачивании внеклеточной среды выше pH 7.9, имеет точку 50% эффекта примерно pH 8.5 и выходит на насыщение при рН свыше 9.0. Активация IRR приводит к фосфорилиро-ванию каскадных внутриклеточных белков IRS-1 и AKT, и приводит к перестройке клеточного цитоскелета [2]. Цель настоящей работы - получить и охарактеризовать поликлональные антитела (ПА) к IRR для изучения его структуры и функций в физиологических экспериментах. Для получения антител получена плазмида pET28a-hlRR-C со всеми необходимыми элементами для успешной экспрессии C-концевой участка IRR в клетках E. coli. Разработана система экспрессии и очистки целевого белка. Проведена иммунизация кроликов антигеном до достижения стойкого иммунного ответа. В результате нами получена сыворотка крови с ПА против C-концевого участка IRR. Антитела охарактеризованы иммунохимическими методами: вестерн блот, иммуноцитохимия и иммунопреципитация. Оценка антител показала, что антитела a-c-hIRR-k1 способны специфично связываться с IRR человека и мыши, а антитела a-c-hIRR-k2 специфичны ко всем рецепторам из семейства рецептора инсулина. Получение антител к IRR для проведения структурнофункциональных исследований, представляет особый юин-терес для изучения фундаментальных основ механизма щелочной чувствительности, а также для развития в будущем новых терапевтических подходов, созданию лекарств для лечения заболеваний, связанных с нарушением кислотно-щелочного равновесия и некоторых форм рака.