OVEREXPRESSION GENE OF HUMAN LEUKOCYTE ANTIGEN G IN IPS CELLS OF HEMOPHILIC MOUSE WITH ALPHOID HUMAN ARTIFICIAL CHROMOSOME CARRYING FVIII GENE

Abstract

Full Text

Человеческий лейкоцитарный антиген G (HLA-G) экспрессируется в плаценте и позволяет обеспечить иммунотолерантность материнского иммунитета к антигенным клеткам плаценты и плода[1]. Ранее было показано, что экспрессия HLA-G в раковых клетках способствует избеганию иммунного ответа[2]. Кроме того было показано, что экспрессия в трансплантируемых органах HLA-G также способствует их приживаемости[2]. Свойство HLA-G, подавлять реакцию иммунного-от-торжения вселяет надежду на его использование для получения гипоиммуногенной линии ИПС клеток. В данном исследовании нами были получены 4 линии клеток с гиперэкспрессией HLA-G. Две линии ИПС клеток мыши с гемофильным фенотипом экспрессирующие HLA-G1 и HLA-G5 соответственно. В данном случае гиперэкспрессия достигалась за счёт лентивирусной трансфекции, при этом трансген находился под промотором фактора элонгации трансляции 1 (промотор EF1-a). Также было получено 2 линии ИПС клеток гемофильной мыши с альфоидной искусственной хромосомой человека, содержащей фактора свёртывания 8 (ИХЧ-FVIII) с экспрессией HLA-G1 и HLA-G5 соответственно. При этом, гиперэкспрессия достигалась за счёт интеграции трансгена методом CRISPR/CAS9-knock-in в регион генома Rosa26. В данном случае трансген находился под промотором CAG. С помощью вэстерн блота мы показали, что оба метода позволяют обеспечить высокий уровень гиперэкспресии. При этом, уровень экспрессии достигнутый за счет CRISPR-knock-in выше чем за счёт лентивирусной трансфекции. В дальнейшем планируется оценить эффект гиперэкспрессии HLA-G в цитотоксическом тесте in-vitro, а также провести трансплантацию ИПС клеток с гиперэкспрессией HLA-G мышам линии ^57BL/6) и оценить их приживаемость.