Caco-2 cell line as a model for testing the transport protein P-glycoprotein function

Abstract

Full Text

Гликопротеин-Р (P-glycoprotein, Pgp, ABCB1-белок, MDR1-белок) - АТФ-зависимый белок-транспортер, локализующийся на билиарной поверхности гепатоцитов, на апикальной мембране энтероцитов и эпителиоцитов проксимальных почечных канальцев, на цитоплазматических мембранах эндотелиоцитов гистогематических барьеров, а также опухолевых клеток. Основной функцией Pgp является выведение ксено- и эндобиотиков из клеток во внеклеточное пространство, биологические жидкости (кровь, желчь, мочу) и просвет кишечника. Для оценки функционирования Pgp при патологических состояниях или изучения влияния экзогенных и эндогенных веществ на его активность используют клеточные линии, гиперэкспрессирующие данный белок-транспортер. Цель настоящего исследования - изучить возможность использования линии клеток Caco-2, для оценки активности белка-транспортера Pgp. Линия клеток Caco-2 была закуплена в ФГБУН «Институт цитологии» РАН (Санкт-Петербург). Методами иммуноцитохимии и вестерн-блот было подтверждено наличие данного белка в цитоплазматических мембранах клеток данной линии. Для оценки активности Pgp клетки линии Caco-2 высеивали в специальную трансвелл-систему. Оценивали транспорт субстрата Pgp - фексофенади-на (150 мкмоль/л) из клеток наружу. Концентрацию фексофенадина определяли методом ВЭЖХ с УФ детектированием. Показано, что классические ингибиторы Pgp - вера-памил (200, 100, 50, 10, 1 мкмоль/л) и хинидин (200, 100, 50, 10, 1 мкмоль/л) дозозависимо снижали транспорт фексофенадина из клеток линии Caco-2, что свидетельствует об уменьшении активности изучаемого белка-транспортера. Таким образом, линия клеток Caco-2, полученная из ФГБУН «Институт цитологии» РАН (Санкт-Петербург), может быть использована для изучения функционирования белка-транспортера Pgp.