Mul'tipotentnyy potentsial MMSK kostnogo mozga cheloveka pri kul'tivirovanii

Abstract

Full Text

Костный мозг - уникальный источник клеток для регенеративной медицины. Считается, что мезенхимные клетки костного мозга, находясь в стволовых нишах обладают продолжительным жизненным циклом, за счет чего могут сохранять свою «незрелость». Показано, что при длительном культивировании in vitro, мезенхимные МСК сохраняют высокий пролиферативный потенциал в течение длительного времени. В настоящее время проводятся исследования по изучению свойств и биологических характеристик мезенхимных клеток при культивировании, однако данных об их биологическом возрасте крайне мало. целью исследования являлось изучение изменения характеристик, отражающих биологический возраст длительно живущих культур ex vivo. Клетки Км человека выделяли по стандартной методике в градиенте плотности, затем переносили в культуральные флаконы и культивировали в питательной среде DMEM-F12 с добавлением 10% фетальной сыворотки. В работе использовали клетки 0 и 3 пассежей. для проверки соответствия критериям ММСК, полученные клетки были охарактеризованы на проточном цитофлюо-риметре, по экспрессии маркеров (CD90, CD105, CD73, CD45) а также Oct-4 и SSEA-4. для оценки количества SSEA4+ клеток использовали FAC-сортер. Считается, что Oct4 и SSEA-4 - маркеры, характерные для эмбриональных стволовых клеток и iPS, свидетельствующие о высокой мультипотентной пластичности клеток, а также возможности дифференци-ровки клеток в экто- и мезодермальном направлениях. Последние исследования показали, что данные маркеры присутствуют также и на мультипотентных клетках, что подтверждается возможностью их дифференци-ровки как в эктодермальном, так и мезодермальном направлениях. Фенотип клеток на 0 и 3 пассаже был CD90+, CD105+, CD73+, CD45-. Количество клеток, на которых экспрессируется Oct-4 и SSEA-4 на 0 пассаже составляло менее 10% от общего числа ММСК. На 3 пассаже было показано увеличение числа SSEA-4+ клеток до 35%, причем все эти клетки были также Oct-4-положительны. Таким образом, исследование показало, что в процессе культивирования увеличивается доля мультипотент-ных Oct4+SSEA-4+ клеток в культуре, что, вероятно связано с сохранением раннего биологического возраста.