Immunomoduliruyushchie svoystva indutsirovannykh mikrovezikul, poluchennykh iz mezenkhimnykh stvolovykh kletok

Abstract

Full Text

Мезенхимные стволовые клетки (МСК) проявляют иммуносупрессивное действие, подавляя пролиферацию Т- и В-клеток, модулируя созревание и активацию регуляторных Т-клеток, ингибируя секрецию провос-палительных цитокинов. Терапевтический потенциал аллогенных МСК исследуется при воспалительных заболеваниях, аутоиммунных заболеваниях и отторжения трансплантата (http://clinicaltrials.gov/). Однако применение СК в клинике ограничено вследствие высокой стоимости приготовления клеточного препарата, риска неограниченной пролиферации клеток, а также невозможности хранения препарата. Внеклеточные везикулы (ВВ) - перспективный инструмент бесклеточной терапии. ВВ сохраняют биологическую активность и иммунологические свойства родительских СК, не несут риска формирования опухолей, процедура получения промышленно адаптируема, возможно сохранить препарат ВВ. Однако развитие терапевтических подходов на основе ВВ ограничивает небольшой выход продукта. Известен способ получения индуцированных мембранных везикул в повышенном количестве с использованием цитохалазина В. Мембранные везикулы индуцированные цитохала-зином В (МВ-ЦВ) представляют собой безъядерные везикулы, окруженные мембраной и содержащие цитоплазматическое содержимое родительских клеток. Ранее МВ-ЦВ были получены из клеток HEK293, 3T3 фибробластов, HUVEC, MDCKII-MDR1, SH-SY5Y и PC3. Однако до настоящего времени иммунологические свойства МВ-ЦВ, полученных из МСК, исследованы не были. В данной работе впервые нами были охарактеризованы МВ-ЦВ из МСК. Был оценен иммунный ответ и активация мононуклеарных клеток периферической крови (МКПК) после обработки МВ-ЦВ мСк. Для оценки влияния МВ-ЦВ на активацию лимфоцитов, МКПК, предварительно окрашенные CFDA SE, инкубировали с МВ-ЦВ МСК в течение 24 часов, а затем обрабатывали 10 мкг/мл ФГА. Как и ожидалось, ФГА значительно индуцировал пролиферацию МКПК (43,1 ±5,9% пролиферирующих МКПК). Обнаружено, что МВ-ЦВ МСК ингибировали активированную ФГА пролиферацию МКПК (15,35±0,6% пролиферирующих МКПК). Затем мы проанализировали влияние МВ-ЦВ на ФГА-активированную пролиферацию цитоток-сических T-лимфоцитов (CD45+CD3+CD8+), T-хелперов (CD45+CD3+CD4+) и B-клеток (CD45+CD3-CD19+). Мы обнаружили, что предварительная обработка МВ-ЦВ МСК приводит к ингибированию ФГА-активированной пролиферации CD4+, CD19+, CD8+ клеток в 2.9, 2.1 и 2.9 раза соответственно.