Vliyanie ko-ekspressii VEGF i FGF-2 na protsessy angiogeneza in vivo

Abstract

Full Text

По данным ВОЗ основной причиной смертности населения в развитых странах являются сердечно-сосудистые заболевания, каждый год из-за них погибает около 17,9 миллиона людей.Несмотря на совершенствование хирургических и эндоваскулярных технологий,данные методы лечения недоступны около 30% пациентов из-за плохого состояния сосудистого русла и риска сердечного приступа.В связи с этим поиск эффективных методов лечения, способных предотвратить прогрессирование ишемических заболеваний остается актуальной задачей здравоохранения.Генная терапия с использованием проангиогенных молекул является прогрессивной стратегией, однако последние рандомизированные исследования не смогли однозначно доказать эффективность данного подхода.Поэтому существует необходимость в более детальном изучении влияния генных конструкций на активацию естественных процессов ангиогенеза. В этой связи, нами были созданы и протестированы мультигенные плазмидные конструкции in vitro. Рекомбинантные плазмиды содержали фурин-2А-пептидную последовательность пикорновирусов и кодон оптимизированные последовательности фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) и (или) фактора роста фибробластов (FGF2), красного флуоресцентного белка (DsRed). В данной работе, для анализа терапевтического потенциала данных конструкций in vivo мы имплантировали генетически-модифицированные клетки HEK293T в составе матригеля иммунодефицитным мышам линии BALB/c Nude. Имплантаты контрольных групп характеризовались молочно-белым цветом и низким уровнем гемоглоби-на.Тем не менее, в имплантатах, содержащих клетки HEK293T, трансфицированные репортёрной плазмидой pVax-DsRed, содержание гемоглобина было выше, чем в чистом Матригеле, что говорит о наличии некоторых проангиогенных свойств у клеток HEK293T. Клетки, гиперэспрессирующие VEGF и FGF-2 активировали ангиогенез: красно-коричневые имплантаты матригеля содержали большое количество кровеносных сосудов. Однако в группе pVax-FGF2 уровень гемоглобина был выше по сравнению с группой pVax-VEGF-FGF2.Под воздействием pVAX-FGF2 формировалось меньшее количество сосудов по сравнению с pVax-VEGF165A-FGF2, однако диаметр был их шире, что повлияло на концентрацию гемоглобина. Таким образом, ко-экспрессия VEGF и FGF-2 способствует эффективной васкуляризации имплантатов матригеля и стимулирует образование сосудов in vivo, а разработанные плазмидные конструкции могут быть использованы в дальнейших исследованиях направленных на стимулирование ангиогенеза.