Proangiogennaya aktivnost' mononuklearnykh kletok krovi pupoviny cheloveka geneticheski modifitsirovannykh rekombinantnymi adenovirusami

Abstract

Full Text

К настоящему времени предложено множество подходов для индукции терапевтического ангиогенеза включающие в себя разнообразные хирургические техники, применение специфических медикаментозных препаратов, белков индукторов ангиогенеза, рекомбинантных молекул ДНК и применение различных клеточных типов.При этом в качестве наиболее перспективных технологий могут рассматриваться подходы базирующиеся на использовании ex vivo генетически модифицированных клеток.В этом аспекте, мононуклеарные клетки крови пуповины (МККП) человека продолжают оставаться перспективными «инструментами» для доставки генно-инженерных систем и экспрессии рекомбинантных белков. В исследовании мы определили влияние МККП гиперэкспрессирующих проангиогенные факторы на процессы индукции ангиогенеза. Получены МККП экспрессирующие сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), а также МККП одновременно секретирующие VEGF, основной фактор роста фибробластов (FGF2) и стромаль-ный фактор роста 1 альфа (SDF1-a) (МККП-VSFIB качестве групп сравнения использовали импланты матригеля c МККП-GFP и без МККП. Спустя семь суток после имплантации выделенные фрагменты Матригеля имели вид правильных дисков. Верификация экспрессии рекомбинантных генов в имплантах, показала присутствие целевых мРНК. Цвет имплантов коррелировал со степенью васкуля-ризации и варьировал от молочно-белого (контрольный Матригель) до красно-коричневого (МККП-VSF). Показано, что концентрация гемоглобина в имплантатах, содержащих МККП-VEGF, или МККП-VSF достоверно выше по сравнению с образцами содержащими фрагменты Матригеля с МККП-GFP и без МККП. Гистологические исследования выявили, что препараты Матригеля окружены тонкой соединительнотканной капсулой в вглубь которых врастает соединительная ткань.В группах Матригеля без МККП (1,5±0,5 ед./ мм2) и МККП-GFP (7,5±3 ед./мм2) наблюдались редкие капилляры. В группе МККП-VEGF присутствуют сосуды различного диаметра (16±5 ед./мм2), проникающие в центральные области имплантата, клетки экспрессируют VEGF. МККП-VSF характеризуются врастанием в глубь имплантатов соединительной ткани и формированием сосудов (23±5 ед./мм2) различного калибра, которые проникают в центральные области имплантата, МККП позитивны в отношении VEGF, FGF2 и SDF1-a. Таким образом, модификация МККП аденовирусами увеличивает экспрессию ими проангиогенных факторов. Комбинированная доставка нескольких факторов с использованием МККП показывает взаимный синергетический эффект при стимуляции ангиогенеза.