Konditsionirovannaya sreda s sekretiruemym hBMP-2 kak osnova dlya transformatsii chelovecheskikh MSC, poluchennykh iz zhirovoy tkani, dlya usileniya ikh osteogennogo potentsiala

Abstract

Full Text

Костные морфогенетические факторы роста (BMP) - группа цитокинов формирующая ткани кости и хряща. Рекомбинантный костный морфогенетический белок-2 (rhBMP-2) является ортобиологическим, способствует образованию кости и сращению позвоночника, используется в хирургических подходах однако имеет много побочных эффектов, так как может вызывать воспаления, малигнизацию и остеолиз. Управление по санитарному надзору FDA (США) выпустило предупреждение об опасных побочных эффектах, связанных с использованием rhBMP-2. Обзор 2011 года выявил занижение числа побочных явлений, включая риск развития рака. В последнее время клеточная терапия стала потенциальным вариантом лечения, способствующим восстановлению кости. Остеогенная способность стволовых клеток из жировой ткани в качестве терапевтического агента для восстановления кости описана в литературе. В работе мы анализировали данные экспресии введенного трансгена hBMP-2 в две клеточные линии, чтобы оценить возможность использовать кондиционированную среду на их основе для трансформации человеческих MSC, полученных из жировой ткани, для усиления их остеогенного потенциала. Материалы иметоды. Вектор, содержащий синтетическую конструкцию BMP2, вводился в культуру HEK-293 и контрольные клетки CHO методом липофекции. Экспрессию гена на уровне транскрипции подтверждали методом ОТ-ПЦР. HEK293 оценку экспрессии трансгена в клетках определяли детекцией моноклональными антителами к BMP-2 (Pierce, MA1-26766) вестерн-бло-та, микроскопированием и оценкой при помощи программы ImageJ. Результаты и обсуждение. Продукция BMP- 2 в культуральной жидкости CHO (контроль) была около 0,1-3 нг/106 клеток как предел детектируемого сигнала, и BMP-2 -HEK2, продуцирующей приблизительно 20 нг/106 клеток BMP-2 в течение 3 дней (пятая часть от контрольного нанесения на блоте), что соответсвует литературным данным. Трансген в клетках млекопитающих демонстрирует устойчиво низкую выработку BMP-2, что должно приводить длительному периоду полужизни остеоиндуктивного сигнала и, таким образом, к увеличению дифференцировки остеопрогениторных клеток из MSC, полученных из жировой ткани, для усиления их остеогенного потенциала.