Effects of luteotropic factors on the state of metaphase-II chromosomes when exposed to bovine oocytes in the second phase of in vitro maturation

Abstract

Full Text

Вторая фаза созревания ооцитов in vitro, охватывающая период от метафазы I до метафазы II, критически важна для приобретения ими компетенции к эмбриональному развитию. В представленной работе было изучено влияние двух лютеотропных факторов - прогестерона (ПГ) и про-лактина (ПРЛ) - в начале и середине второй фазы созревания ооцитов коров на частоту аномальных изменений хромосом на стадии метафазы-II (M-II). Ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) культивировали в течение 12 или 16 ч. в стандартной среде созревания (ТС-199, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС), 10 мкг/мл ФСГ и 10 мкг/мл ЛГ). Для завершения созревания ооцитов ОКК переносили в среду ТС-199, содержащую 10% ФБС (система 1) или 3 мг/мл БСА (система 2). В обеих системах в среду опытных групп вносили 50 нг/мл ПГ (Sigma, США) или 50 нг/мл ПРЛ (Эндокринологический научный центр, Москва). Общее время культивирования во всех группах составляло 24 ч. Для проведения цитогенетического анализа ооциты фиксировали по методу Тарковского. К деструктивным изменениям хромосом на стадии M-II относили деконденсацию, частичное слипание и образование единой комковатой массы. После культивирования в стандартной среде относительное число ооцитов, достигших стадий анафазы-I или телофазы-I, составляло 3,1 ±1,6 (12 ч.) и 31,8±1,8% (16 ч). Через 24 ч созревания доля яйцеклеток, находящихся на стадии M-II мейоза, была сходной во всех экспериментальных группах и достигала 83,2-94,4%. При воздействии на ооциты в начале второй фазы созревания (через 12 ч.) ПГ и ПРЛ в обеих системах уменьшали частоту аномальных изменений хромосом на стадии M-II с 30,2-30,3% (контроль) до 14,5-17,7% (Р<0,01). Ингибирующее действие гормонов на хромосомные нарушения (Р<0,01) также наблюдали при их внесении в систему 1 в середине второй фазы созревания ооцитов (через 16 ч.). В этот же период культивирования в системе 2 только ПГ снижал долю яйцеклеток с деструктивными изменениями хромосом (с 31,7±2,7 до 20,0±2,5%, Р<0,01). Таким образом, во вторую фазу созревания ооцитов коров ПГ и ПРЛ оказывают тормозящее влияние на аномальные модификации хромосом, механизм которого, очевидно, различается.