Razrabotka kletochno-inzhenernoy konstruktsii s izmenennym genetipom kul'tury mmsk dlya zameshcheniya defektov khryashchevoy tkani sustavov

Abstract

Full Text

Гиалиновый хрящ представляет собой аваскулярную соединительную ткань суставной поверхности состоящей преимущественно из воды и белков внеклеточного матрикса. Он способен выдерживать большие механические нагрузки и обратимо деформироваться, но обладает низкиим регенеративным потенциалом. Перспективным направлением медицины является трансплантация на место повреждения хряща клеточноинженерной конструкции (КИК) состоящей из биодегра-дируемой мембраны и помещённых в неё генетически модифицированных аутологичных клеток (мезенхимальных мультипотентных стволовых клеток (ММСК), хондроци-тов и др.) с активацией синтеза белков внеклеточного матрикса. Одним из вариантов такой модификации клеток является их трансфецирование плазмидой, несущей ген tgfp3 - одного из важнейших индукторов хондрогенеза. Целью исследования стало создание КИК с использованием генетически активированных мезенхимальных мультипотентных стромальных клеток (ММСК) и биоде-градируемой полилактидной мембраны для замещения поверхностных дефектов гиалинового хряща. Материалы и методы. Биодеградируемую мембрану синтезированли из полимолочной кислоты. ММСК выделяли из бедренных костей половозрелых крыс и культивировались до 3 пассажа при 37оС и 5% С02. Трансфекция осуществлялась с помощью электропо-ратора созданной рекомбинантной плазмидой на основе вектора pEGFP-N3 и содержащий вставку гена tgfp3 и флюоресцентный маркер. Совмещение культуры клеток и мембраны происходило динамическим способом с помощью разработанного и запатентованного устройства (Ru 2019 104 311), а оценка результата происходило с помощью методики сканирующей электронной микроскопии и гистологическими методами. Результаты. По результатам анализа методом проточной цитометрии было подтверждено принадлежность используемых клеток к ММСК. С помощью секвенирова-ния и гель-электрофореза была подтверждена последовательность и наличие вставки в созданной плазмиде. При оценке трансфецированных клеток было обнаружены скопления клеточных агрегатов с флюоресцентной светимостью, что подтверждает трансфецирование клеток и действие белка на культуру клеток. Устройство по заселению КИК позволило подтвердить наличие клеток как на её поверхности, так и внутри инженерной конструкции. Выводы. Разработана КИК, состоящая из культуры ММСК синтезирующих важнейший индуктор хондрогенеза - цитокин Tgfp3 и биодеградируемого носителя. Планируется трансплантация конструкции в область дефекта гиалинового хряща экспериментального животного с оценкой результата в динамике.