Subcultures of primary tripsinized cells of kidney and skin of the rabbit's fetus for virology and biotechnology

Abstract

Full Text

В практической вирусологии и биотехнологии как субстрат для репродукции вирусов нашли широкое применение различные типы культивируемых клеток. Определяющим критерием возможности использования тех или иных культур клеток в данном направлении является их чувствительность к вирусам. Целью исследований явилось получение и оценка пермиссивности субкультур клеток почки и кожи плода кролика к выделенному в РФ вирусу заразного узелкового дерматита КРС и оценки перспектив использования этих культур в биотехнологии получения защитных препаратов против миксоматоза кроликов. Методом ферментативной дезагрегации тканей почек и кожи плода кролика калифорнийской породы получены первичные культуры клеток почек плода кролика (ППКр) и кожи плода кролика (КПКр). В результате последовательных пересевов в среде ОМЕМ с 10% фетальной сыворотки КРС (FBS) получены субкультуры, которые на уровне 3, 6, 9 пассажей криоконсервированы в жидкий азот. После размораживания на нулевом пассаже жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим составляла от 78 до 85%, монослой культуры ППКр был представлен эпителиоподобными клетками, а культуры КПКр - клетками фибробластоподобного типа. Изучение чувствительности субкультур клеток ППКр и КПКр показало их пермиссивность к вирусу заразного узелкового дерматита КРС (Волгоградский изолят) и максимальные титры инфекционной активности вируса отмеченные на 5 день культивирования составили 5,0 lg ТЦД50АМ3 и 5,5 ТЦДЮАм3 соответственно. Для вируса миксомы кроликов (вакцинный штамм В82) развитие ЦПД сопровождалось деструкцией монослоя, округлением и отслоением клеток от субстрата на 3-4 день культивирования с накоплением вируса в культуре КПКр до 5,83-6,16 ТЦД50/ 3 а в культуре ППКр - 5,5-5,83 ТЦД50/смз. ' Полученные данные свидетельствуют о возможности использования полученных субкультур охарактеризованных клеток почек плода и кожи плода кролика из криобанка для проведения вирусологических и биотехнологических исследований.