The impact of nuclear receptors LXR and RXR agonists treatment on small GTPase ARL7 level in cultured HeLe and Vero cells

Abstract

Full Text

Микротрубочки (МТ) являются компонентом цитоскелета эукариотических клеток. В клетках животных в качестве основного центра организации МТ (ЦОМТ) выступает центросома. В интерфазе альтернативными ЦОМТ также могут становиться плазматическая мембрана и мембраны аппарата Гольджи (АГ). Молекулярные механизмы организации МТ на АГ изучены фрагментарно. Клеточные культуры Vero и BS-C-1 обе выделены из эпителия почки зелёной мартышки, однако существенно отличаются активностью АГ в качестве ЦОМТ. Мы также выявили различие в уровне экспрессии малой ГТФазы ARL7 в двух данных культурах клеток, проявляющееся в приблизительно четырёхкратном превышении концентрации как мРНК, так и белка в BS-C-1 по сравнению с Vero. Ранее было показано, что ARL7 взаимодействует с тубулином МТ. Мы предположили, что ARL7 может являться участником процессов организации МТ на АГ. Согласно опубликованным данным, обработка клеток агонистами Х-рецептора печени (LXR) и ретиноидного Х-рецептора (RXR) приводит к повышению концентрации ARL7 в HeLa. Мы попытались воспроизвести описанный для HeLa эффект и далее применить к Vero указанный тип воздействия на уровень ARL7 для идентификации возможных изменений в организации МТ. Клетки инкубировали с T0901317 и бексаротеном - агонистами LXR и RXR соответственно. После обработки HeLa агонистами LXR и RXR, применяемыми по отдельности, в течение 2 суток уровень белка ARL7 возрастает независимо от концентраций агонистов (в диапазоне 0,1-10 мкМ для T0901317 и 0,5-2,5 мкМ для бексаротена). Продление времени воздействия до 7 суток и совместное использование агонистов LXR и RXR приводит к более выраженному повышению уровня ARL7 в HeLa. Обработка HeLa смесью 2.5 мкМ T0901317 и 2.5 мкМ бексаротена в течение 7 дней приводит к приблизительно трёхкратному повышению уровня ARL7. Однако при тех же условиях воздействия в Vero возрастания уровня ARL7 не наблюдается, несмотря на активацию в клетках транскрипционного фактора LXR/RXR, детектированную по повышению уровня белка ABCA1, ген которого находится под прямой регуляцией LXR/RXR. Таким образом, установлено различие в молекулярных механизмах регуляции уровня ARL7 в культурах клеток HeLa и Vero.