Hormonal in vitro regulation of the proliferative activity of follicular cells in hens of different ages

Abstract

Full Text

Характер роста преовуляторных фолликулов кур, сопряженный с овуляторным циклом, изменяется в процессе репродуктивного старения [1]. Хотя имеющиеся данные указывают на участие половых стероидных гормонов в регуляции роста фолликулярной стенки, их роль в этом процессе до сих пор не ясна. В настоящей работе было исследовано in vitro влияние эстрадиола-17р (E2) и прогестерона (P4) на пролиферативную активность клеток теки и гранулезы у кур в возрасте 33-34 недели (>10 яиц на цикл яйцекладки) и у кур в возрасте 79-83 недели (3-6 яиц на цикл). Клетки выделяли из преовуляторных фолликулов F1 и F3 и культивировали при концентрации 4х105 на 1 мл в 96-луночных планшетах в течение 40 ч в 100 мкл среды, содержащей 20 мл/л заменителя сыворотки (Sigma, США). Среда в опытных группах содержала 1 нг/мл E2 или 10 нг/ мл P4. Пролиферативную активность клеток оценивали колориметрическим методом при использовании набора CellTiter 96 Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay (Promega, США). За 100% жизнеспособных клеток (ЖСК) принимали оптическую плотность в лунках с клетками до культивирования. Внесение E2 в контрольную среду приводило к возрастанию относительного числа ЖСК гранулезы из фолликулов F1 и F3 у возрастных кур (соответственно с 154,7±5,6 до 181,6±5,4% и с 175,4±18,8 до 209,7±18,1%, P<0,01) и только из фолликулов F3 у молодых кур (с 201,1±12,9 до 249,8±19,2%, P<0,05). У репродуктивно постаревших птиц пролиферативную активность гранулезных клеток из фолликулов F1 стимулировал также и P4, повышая число ЖСК до 181,3±7,7% (P<0,01). Кроме того, P4 снижал по сравнению с контролем относительное число ЖСК теки из фолликулов F3 у молодых кур (с 199,3±15,9 до 174,4±13,2%, P<0,05), но не влиял на пролиферативную активность текальных клеток у возрастных птиц. Таким образом, репродуктивное старение кур влияет на чувствительность клеток теки и гранулезы к рост-модулирующему влиянию E2 и P4, что может обусловливать изменение характера роста стенки преовуля-торных фолликулов в динамике овуляторного цикла.