Vliyanie korotkogo gipoksicheskogo stressa na fenotip i sekretom monotsit-proizvodnykh makrofagov pri vzaimodeystvii s mezenkhimal'nymi stromal'nymi kletkami

Abstract

Full Text

Гипоксические условия оказывают значимое регуляторное воздействие на свойства мезенхимальных стромальных клеток (МСК), а также моноцитпроизводных макрофагов (МН/МФ), что может повлиять на результат взаимодействия этих клеток. Цель: изучение влияния гипоксического стресса на фенотип и секретом МН/МФ при прямом и паракрин-ном взаимодействии с МСК in vitro. Моноциты (МН) выделяли из фракции мононуклеа-ров периферической крови человека, а МСК из жировой ткани человека и культивировали в стандартных условиях (5% СО2, 37°С). Для оценки функционального статуса и активности МН/МФ проводили их со-культивирование с МСК. Со-культивирование проводили в течение 6 дней, после чего клетки подвергались короткому (24 ч) гипок-сическому воздействию (1% О2). Фенотип МН и МН/ МФ был охарактеризован методом проточной цитометрии по следующим маркерам - созревание (CD11b), про-воспалительная активация (CD80, CD86, HLA-DR) и M2 (противовоспалительный) фенотип (CD163, CD206). Изменение экспрессии генов про- и противовосполитель-ных цитокинов определяли при помощи полимеразно-цепной реакции. Паракринный профиль МН/МФ оценивали по внутриклеточному содержанию цитокинов с помощью твердофазного иммуно-ферментного анализа. В присутствии МСК МН/МФ проявляли признаки М2 поляризации, о чем свидетельствовало увеличение экспрессии CD163 и CD206. Поляризация фенотипа МН/МФ в присутствии МСК, как считается, сопровождается сдвигом профиля продукции растворимых медиаторов. Мы не обнаружили при взаимодействии МН/МФ с МСК изменения транскрипционной активности IL10, IL12, TNFA. В тоже время, отмечено достоверное увеличение транскрипционной активности IL6 при паракринном взаимодействии с МСК. Гипоксический стресс вызывал достоверное повышение экспрессии IL6 в МН/МФ. Оценка внутриклеточного содержания цитокинов IL-6, IL-10, TNF-а в Мн/МФ показала многократное увеличение концентрации IL-6 при взаимодействии с МСК, что подтвердило формирование МН/МФ фенотипа, обозначаемого как МСК-обученные макрофаги. Мы не выявили изменение внутриклеточного содержания IL- 10 и TNF-а в МН/МФ. Короткий гипоксический стресс не влиял на уровень цитокинов IL-6, IL-10, TNFа в МН/ МФ в монокультуре и при сокультивировании с МСК. Короткое гипоксическое воздействие не влияло на фенотип макрофагов, а взаимодействие с МСК усиливало формирование М2 фенотипа и их функциональную активность.