BMKP dlya zameshcheniya defektov kozhi: kharakteristika i doklinicheskoe issledovanie

Full Text

Разработан БМКП для замещения дефектов кожи на основе естественных биополимеров и мезенхимальных стволовых клеток (МСК) жировой ткани человека. МСК вводили в состав в процессе формирования БМКП и с помощью световой и фазово-контрастной микроскопии показали динамику и равномерное распределение их в структуре матрицы. В 1 сутки после формирования МСК были округлыми, начиная с 3 суток - «выбрасывали» отростки и «расправлялись». К 6 дню в структуре матрицы была сформирована «клеточная сеть» с множеством межклеточных контактов, и БМКП были готовы для использования. Все материалы и конструкты были стерильны. Для характеристики МСК в структуре БМКП выбирали методы, позволяющие оценить их без разрушения матрицы, избежать выраженной гибели и повреждения клеток. С помощью флуоресцентной микроскопии (красители Lipophilic Tracers-Dio и Hoecst 3334, цифровой имиджер Cytation5) показано сохранение МСК типичной морфологии и жизнеспособности. Количественный анализ (Патент РФ № 2 675 376) показал пролифератив-ную активность МСК в структуре конструкта. Изменение содержания VEGF-A в ростовой среде (метод ИФА) - выраженную секреторную активность. Для фенотипиро-вания МСК выделяли из структуры БМКП с помощью коллагеназы. После выделения фиксировали снижение доли клеток CD90+ до 80%. Культивирование выделенных клеток на пластике привело к восстановлению фенотипа МСК. Оценивали эффективность БМКП при восстановлении дефекта кожи на модели полнослойной кожной раны крыс с кольцом. При формировании БМКП в экспериментальных условиях использовали охарактеризованные МСК жировой ткани крысы. Сформировали три группы: 1 - с полнослойной кожной раной под увлажняющей повязкой; 2 - с полнослойной кожной раной со скаффолдом (матрицей) без клеток; 3 - с полнослойной кожной раной с БМКП. Состояние ран контролировали с помощью планиметрии, видеонаблюдения, дерматоскопии, гистологических и иммуногистохимических методов. Животных выводили из эксперимента на 7, 14, 21 и 28 сутки. Продемонстрирована эффективность применения БМКП: отмечено раннее формирование грануляционной ткани, ускорение процессов ангиогенеза, образование и организация правильно упорядоченных коллагеновых и элластиновых волокон в подлежащей ткани, ускорение эпителизации.

About the authors

Diana Yakovlevna Aleynik

Email: daleynik@yandex.ru

Marfa Nikolaevna Egorikhina

Irina Nikolaevna Charykova

Yuliya Pavlovna Rubtsova

Larisa Nikolaevna Sosnina

Andrey Aleksandrovich Struchkov

Petr Vladimirovich Peretyagin

Anna Gennad'evna Solov'eva

Natal'ya Yur'evna Orlinskaya

References

Supplementary files