Modeling of early stages of rabdomyogenesis in vitro

Abstract

Full Text

Целью исследования является моделирование ранних стадий рабдомиогенеза in vitro, индукции слияния миоген-ных клеток предшественниц в культуре, что в перспективе может стать одним из этапов технологий генно-клеточной терапии прогрессирующих мышечных дистрофий. Материал и методы: в качестве миогенной линии использована мышиные миобласты С2С12, предоставленные Институтом биологии гена (Москва). Клетки были культивированы на среде DMEM F12 с добавлением 20% FBS, 1% глутамата и 1% смеси пенициллин-стрептомицин (Sigma-Aldrich, США). Индукция миогенной дифференцировки проводилась на 4-5 сутки путем смены среды на DMEM, HG 2%, FBS 1%, глутамат 1%, пенициллин-стрептомицин (Sigma-Aldrich, США). Культивирование было продолжено в течение 8 суток. В дальнейшем, после фиксации материала проводилась иммуноцитохимическая (ИЦХ) реакция с использованием антител к маркеру поздней миогенной дифференци-ровки MyoG, а-гладкомышечному актину (a-SMA) и белку дисферлину. Индекс слияния (Fusion index, FI) оценивалЬ по формуле FHNm-Qm)/(Nt-1)x100%, где Nm-число ядер в многоядерных структурах, Qm - количество многоядерных структур, Nt - общее число ядер в поле зрения. Результаты и обсуждение. На 4 сутки культивирования на базовой среде в культуре отсутствовали большие