Analiz protivoopukholevoy aktivnosti mezenkhimnykh stvolovykh kletok sobaki, ekspressiruyushchikh geny-supressory opukholi i geny-immunomodulyatory in vitro

Abstract

Full Text

Схожая патофизиология онкологических заболеваний собак и человека делает собак перспективной моделью для исследования эффективности противоопухолевой терапии. Мезенхимные стволовые клетки (МСК) - негемопоэтические клетки-предшественники, которые способны избирательно мигрировать в опухолевые ниши. Поэтому МСК могут быть использованы для целевой доставки противоопухолевых агентов. Одними из таких агентов могут быть цитокины - белки иммунной системы. Многочисленные исследования на клеточных культурах и животных моделях опухолей показали, что цитокины обладают широкой противоопухолевой активностью. МСК были выделены из жировой ткани собаки. Выделенные клетки были в значительной степени положительны по поверхностным маркерам мезенхимных стволовых клеток собаки CD105, CD10, Stro-1 и Thy-1. Мультипотентность МСК была подтверждена путем диф-ференцировки в хондроциты, остеобласты и адипоциты. МСК были генетически модифицированы рекомбинантным лентивирусом, кодирующим родственный фактору некроза опухоли апоптоз-индуцирующий лиганд собаки (TRAIL), интерферон р-1 собаки (IFNp 1) и фосфатазу с двойной субстратной специфичностью собаки (PTEN). Полученную клеточную линию отбирали путем культивирования в среде с бластицидином S (5 мкг/мл) в течение 10 дней. Экспрессия генов была подтверждена ПЦР в режиме реального времени. Для того, чтобы оценить противоопухолевую активность нативных и генетически модифицированных МСК, 2х105 МСК культивировали в течение 24 часов, затем собирали кондиционированную среду (КС). Клетки рака толстой кишки человека HCT-116 культивировали в свежей среде RPMI-1640, либо в КС от нативных или генетически модифицированных МСК. Через 48 часов пролиферативная активность клеток HCT-116, культивировавшихся в КС генетически модифицированных МСК, была значительно ниже (78,97±9,23%) по сравнению с клетками, культивировавшимися в КС нативных МСК (99,71±4,38%) и в свежей среде (100,00±4,36%). В дальнейших экспериментах будет проанализирована противоопухолевая активность полученных МСК на модели спонтанного возникновения опухолей у собак крупных пород in vivo.