Issledovanie vliyaniya rastvorimogo rekombinantnogo belka DLL4-FC na funktsional'nuyu aktivnost' endoteliotsitov v razlichnykh usloviyakh kul'tivirovaniya

Abstract

Full Text

Известно, что белок Dll4 (deltalikeligand 4) - лиганд для рецепторов Notch1 и Notch4, участвует в ангиогенезе. Dll4-Notch сигналинг является негативным регулятором VEGF-индуцированного ангиогенеза, нарушение этого ингибирования приводит к усиленному образованию кровеносных сосудов. Dll4-Fc - растворимый внеклеточный домен Dll4, соединенный с Fc фрагментом человеческого иммуноглобулина, который работает как анти-DlW препарат. Dll4-Fc связывается с рецептором Notch, предотвращая его взаимодействие с эндогенными Notch-лигандами и тем самым ингибирует Notch-сигналинг. Настоящая работа посвящена исследованию влияния рекомбинантного лиганда Dll4-Fc на функциональную активность эндотелиоцитов в различных условиях культивирования с целью возможного использования Dll4-Fc при разработке биомедицинских клеточных продуктов (БМКП), направленных на стимуляцию роста кровеносных сосудов в процессе репарации повреждённых органов и тканей. Для исследования ангиогенных свойств рекомбинантного лиганда Dll4-Fc в работе использовали тест-системы in vitro и in vivo. Исследование проводили на трёх линиях эндотелиальных клеток человека в условиях 2D и 3D культивирования, с использованием БМКП «Эквивалент дермальный ЭД». В данной работе нам не удалось получить данные, которые подтверждали бы позитивное влияние лиганда Dll4-Fc в исследуемых концентрациях на функциональную активность эндотелиальных клеток в условиях 2D культивирования. Однако нам удалось показать про-ангиогенный эффект рекомбинантного лиганда Dll4-Fc в условиях 3D культивирования эндотелиальных клеток человека in vitro и на in vivo модели раноза-живления с использованием БМКП «Эквивалент дермальный ЭД» в композиции с эндотелиальными клетками линии HUVEC. В условиях 3D культивирования на коллагеновом геле клеток линии ECV-304 лиганд Dll4-Fc позитивно влиял на состояние клеточной культуры. При изучении эффективности ранозажив-ления у крыс нанесение «Эквивалента дермального ЭД» в композиции с эндотелиоцитами линии HUVEC и рекомбинантным лигандом Dll4-Fc на раневую поверхность значительно усиливало ангиогенез на 5-е сут. после трансплантации. Таким образом, дальнейшие исследования в этой области могут способствовать разработке новых подходов к терапии различных повреждений тканей и органов.