Otsenka vliyaniya geneticheski modifitsirovannykh mul'tipotentnykh mezenkhimal'nykh stromal'nykh kletok na regeneratsiyu skeletnykh myshts na modeli khronicheskoy ishemii myshts zadnikh konechnostey u krys

Full Text

Распространенность хронических облитериру-ющих заболеваний артерий нижних конечностей (ХОЗАНК) увеличивается с каждым годом, что стимулирует интерес к терапевтическому ангиогенезу. Внедрение генно-клеточной терапии ХОЗАНК в клиническую практику требует доклинических исследований для лучшего понимания механизмов терапевтического эффекта. Целью нашего исследования был комплексный анализ процессов, происходящих на молекулярном и клеточном уровне, после введения нативных мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток жировой ткани (ММСК ЖТ), ММСК ЖТ, трансдуцированных vegf165 (VEGF165-ММСК ЖТ) или ММСК ЖТ, трансдуцированных одновременно vegf165 и sdf1a (VEGF165-SDF1A- Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 244 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине ММСК ЖТ) в икроножную мышцу крысам с моделью ишемии задних конечностей. ММСК ЖТ выделяли из жировой ткани крыс, трансдуцировали рекомбинантными лентивирусами, кодирующими vegf165 или vegf165 + sdf1 a вместе с трансдук-цией egfp. После хирургической индукции ишемии задних конечностей в икроножную мышцу вводили 2x106 VEGF165-ММСК ЖТ, VEGF165-SDF1A-ММСК ЖТ или нативных ММСК ЖТ в 200 мкл физраствора. Проводили забор икроножной и камбаловидной мышц оперированной и интактной задних конечностей на 3, 7, 14, 21 и 28 сут. после введения, часть материала замораживали в парах жидкого азота для проведения мультиплексного анализа (MILLIPLEXkit) гомогенатов мышечной ткани, часть ткани фиксировали в 10% забуференном формалине с последующей заливкой в парафин по стандартной методике для проведения патогистологического анализа. Патогистологический анализ выявил замедленный репаративный рабдомиогенез в условиях отсутствия избыточной экспрессии факторов роста. В группе с нативными ММСК ЖТ на 28-й день мы обнаружили значительное увеличение количества молодых мышечных волокон (33,63±6,25% против 12,72±2,00% против 6,98±1,37% в группах с VEGF165-ММСК ЖТ и VEGF165-SDF1A-ММСК ЖТ соответственно, p<0,05), скорости пролиферации (доля Ki-67+ ядер 18,23±2,03% против 6,65±1,29% против 4,53±0,82%, p<0,05) и уровня экспрессии кавеолина-1 (4,18±0,89 против 0,59±0,21 против 1,38±0,23, p<0,05), известного как ингибитор дифференцировки миобластов. Относительная площадь соединительной ткани к 28-му дню в группе с нативными ММСК ЖТ была заметно увеличена (10,06±1,75% против 1,54±0,12% против 1,93±0,28%, р<0,001), это было связано с тем, что на 21-й день значительно увеличился уровень экспрессии профиброгенных хемокинов: фактора роста соединительной ткани (4,23±0,03 против 1,41 ±0,16 против 0,67±0,17, p<0,05), TIMP-1 и tPAI-1. Паттерны экспрессии про/противовоспалительных цитокинов IL-6, MCP-1, TNFa, GRO\KC\ CINC-1 демонстрировали противовоспалительный потенциал генетически модифицированных ММСК ЖТ. Трансдукция ММСК лентивирусами, несущими гены vegf165 и sdf1a, улучшает их терапевтический потенциал за счет ингибирования фиброгенеза, воспалительной реакции и стимуляции репаративно-го рабдомиогенеза при их введении в икроножную мышцу на модели хронической ишемии задних конечностей у крыс.

About the authors

A. A Titova

Email: anjerika@list.ru

M. O Mavlikeev

E. V Martynova

A. K Shafigullina

E. E Garanina

O. N Chernova

G. O Pevnev

A. A Gumerova

A. A Rizvanov

A. P Kiyasov

References

Supplementary files