Issledovanie tsitokinovogo profilya i protivoopukholevoy aktivnosti mezenkhimnykh stvolovykh kletok, zagruzhennykh preparatom tsisplatin

Abstract

Full Text

Известно, что стромальное микроокружение играет важную роль в опухолевой прогрессии. Иммунные и стромальные клетки, присутствующие в опухолевых нишах, способствуют росту опухоли, ее васкуляриза-ции и метастазированию. В недавних исследованиях было показано, что мезенхимные стволовые клетки (МСК) имеют естественный тропизм к опухолевым нишам и могут служить перспективным вектором для адресной доставки противоопухолевых агентов, в частности, химиотерапевтических препаратов, в места локализации опухоли. Цисплатин является одним из эффективных цитотоксических лекарственных средств и используется для лечения различных видов опухолей. В настоящей работе исследован ци-токиновый профиль и противоопухолевая активность in vitro МСК, выделенных из жировой ткани человека и загруженных препаратом цисплатин. МСК выделяли путем ферментативной обработки жировой ткани человека с использованием 0,2% раствора коллагеназы. Цитофлуориметрический анализ на приборе FACSAriaIII с использованием специфичных антител показал, что выделенные МСК экспрессировали маркеры стволовой мезенхимной клетки, такие Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине 241 как CD44 (97,8%), CD73 (99,4%), CD90 (93,4%), CD29 (96,5%), CD166 (86,2%) и не экспрессировали маркеры гемопоэтических клеток (CD34, CD11b, CD19, CD45, HLA-DR - 0,95%). Для загрузки МСК была выбрана нетоксическая концентрация циспла-тина 5 мкг/мл (Cisplatin-Ebewe), которую подбирали с помощью MTS-теста. После загрузки клетки трип-синизировали, отмывали от препарата и переносили в новый культуральный флакон. Через 48 часов инкубации собирали кондиционированную среду и наносили ее на клетки нейробластомы SH-SY5Y. Было показано, что жизнеспособность SH-SY5Y после инкубации с кондиционированной средой загруженных МСК снизилась на 20% по сравнению с контрольными клетками в обычной культуральной среде и клетками в кондиционированной среде от нативных МСК. Для изучения молекулярных особенностей МСК и исследования секреции хемокинов/цитокинов был проведен мультиплексный анализ кондиционированной среды загруженных клеток и нативных МСК с использованием набора Bio-PlexProHumanCytokine 21-plexAssay (BioRad) на приборе Luminex 200. Концентрации каждого аналита была рассчитана с использованием стандартной кривой. Показано, что у загруженных цисплатином МСК в кондиционированной среде значительно повышается уровень следующих аналитов по сравнению с нативными клетками: IL-2Ra, IL-3, IL-16, HGF, MIF, SCF, SCGF-ß и TRAIL. Данные цитокины участвуют в пролиферации и дифференцировке различных клеток, а TRAIL способен вызывать апоптоз опухолевых клеток. Таким образом, показана противоопухолевая активность МСК, загруженных цисплатином, в отношении опухолевых клеток SH-SY5Y. Полученные результаты указывают на перспективность метода доставки химиотерапевтических препаратов с использованием МСК. Анализ цитокинового профиля загруженных МСК в дальнейшем позволит понять возможные механизмы их взаимодействия с опухолевыми клетками в стромальном микроокружении.