IL-4 vosstanavlivaet aktivatsiyu insulinovoy signalizatsii v adipotsitakh 3T3-L1 bez vliyaniya nd adipogennuyu differentsirovku

Abstract

Full Text

В современном мире ожирение и сахарный диабет 2 типа, а также сопутствующие им патологии, являются одними из основных причин смертности и инвалидизации населения. Известно, что ожирение и диабет 2 типа сопряжены с развитием латентного воспаления жировой ткани. К настоящему времени накоплен определенный опыт как экспериментального, так и клинического применения противовоспалительных препаратов, блокирующих воспалительную клеточную сигнализацию, в терапии СД2Т. Однако, вопрос использования препаратов на основе агонистов противовоспалительной клеточной сигнализации до сих пор остается неизученным. В нашей работе мы проводили изучение возможностей использования агониста противовоспалительной клеточной сигнализации интерлейкина-4 для коррекции инсулиновой резистентности адипоцитов. Исследование проводили на дифференцированных адипоцитах линии 3T3-L1. Преадипоциты 3T3-L1 дифференцировали с использованием дифферен-цировочного коктейля (изобутилметилксантин, дек-саметазон, розиглитазон, инсулин) с дальнейшим контролем дифференцировки по окрашиванию липо-фильным красителем OilRedO и уровню мРНК генов-маркеров адипоцитарной дифференцировки GLUT4 и PPARy методом ПЦР в реальном времени. Для оценки динамики адипогенной дифференцировки в присутствии ИЛ-4 проводили аналогичный контроль дифференцировки на 0, 4, 6 и 10 дни ади-поцитарной дифференцировки. Далее вызывали инсулиновую резистентность с помощью инкубации зрелых адипоцитов в присутствии конъюгата БСА и пальмитиновой кислоты с последующей оценкой уровня поглощения клетками радиоактивных аналогов 2-дезоксиглюкозы, а также оценкой фосфорилирования основных участников инсулиновой сигнализации методом иммуноблоттинга. Для оценки влияния ИЛ-4 на инсулиновую чувствительность клеток выполняли моделирование инсулиновой ре зистентности в присутствии ИЛ-4 в концентрациях 25 нг/мл, 50 нг/мл и 100 нг/мл и оценивали инсулиновую чувствительность адипоцитов аналогичными методами. В ходе исследования были получены данные, свидетельствующие о позитивном влиянии ИЛ-4 на активность инсулиновой сигнализации в жировой ткани. В концентрации 50 нг/мл ИЛ-4 наиболее активно восстанавливал активационные фосфорили-рования субстрата инсулинового рецептора 1 типа, протеинкиназы В, а также субстрата протеинкиназы В AS160. Концентрации ИЛ-4 25 нг/мл и 100 нг/мл оказывали позитивное воздействие на инсулиновую сигнализацию адипоцитов, однако эффективность концентрации ИЛ-4 в 50 нг/мл для восстановления инсулиновой сигнализации значительно выше. Также было показано, что ИЛ-4 в концентрации 50 нг/мл не оказывает значимого действия на способность преадипоцитов 3T3-L1 к адипоцитарной дифферен-цировке по результатам окрашивания липофиль-ным красителем OilRedO и данным ПЦР в реальном времени для генов-маркеров GLUT4 и PPARgamma. Анализируя полученные результаты исследования, стоит отметить, что ИЛ-4 может использоваться для восстановления инсулиновой чувствительности адипоцитов в клеточной модели инсулиновой резистентности. Данное исследование имеет хорошую перспективу для дальнейшей трансляции в область экспериментальной диабетологии, с проверкой данного подхода на животной модели СД2Т, и, впоследствии, в клиническую практику.