Vliyanie rekombinantnykh plazmidnykh konstruktsiy, ekspressiruyushchikh VEGF i FGF2, na sekretom kletok i induktsiyu angiogeneza

Abstract

Full Text

В последние годы в повседневную медицинскую практику активно внедряются передовые методы лечения широкого круга заболеваний человека с применением различных генно-инженерных систем. На данный момент официально зарегистрирован ряд гено-терапевтических препаратов, которые нашли применение в клинической практике. Среди них препараты на основе плазмидных конструкции могут рассматриваться как наиболее безопасные, простые в производстве и использовании. Нами на протяжении длительного времени проводятся работы по созданию тестированию, внедрению и оптимизации рекомбинантных двухкасетных плаз-мидных конструкций для стимуляции естественных процессов ангиогенеза и нейропротекции. В частности, нами созданы двухкассетные плазмидные вектора (pBud-VEGF165-FGF2) одновременно и независимо экспрессирующие два гена с выраженным приоангиогенным потенциалом: сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF165) и основного фактора роста фибробластов человека (FGF2). В представленном исследовании, с использованием технологии Luminex®xMAP и набора Bio-PlexPro™ HumanCytokine 27-plexAssay (BioRad) было показано, что генетически модифицированные клетки линии НЕК293 и стволовые клетки из жировой ткани (СКЖТ) человека, как и ожидалось, по сравнению с нативными клетками, сверх-экспрессируют VEGF и FGF2. Кроме того, имеют повышенный профиль секреции противовоспалительных цитокинов (IL-1ra, IL-10), провосполительных цитокинов (IL-12(p70), IFN-g, TNF-a), хемокинов (IL-8, IP-10, MCP-1) и факторов роста (GM-CSF, PDGF-bb). При моделировании ангиогенеза у крыс in vivo генетически модифицированные клетки в составе Матригеля (внеклеточный матрикс) на седьмой день после подкожного введения формировали зону с повышенной васкуляриза-цией по сравнению с контролем - нативными клетками. При этом была выявлена повышенная плотность сосудов окружающих тканей, развивающиеся сосуды имели более крупные размеры по сравнению с контролем. Кроме того, степень терапевтического воздействия рекомбинантной конструкции оценивали с помощью аппарата допплеровской лазерной диагностики EasyLDIMicrocirculationCamera на модели субкомпенсированного кровоснабжения при регенерации кожно-фасциального лоскута. Непосредственное введение плазмиды pBud-VEGF165-FGF2 по всей длине лоскута приводила к более ранней компенсации кровоснабжения, которая составила 55% по отношению к интактной коже. В то же время, в контрольной группе происходила декомпенсация микроциркуляции, составившая 10% по отношению к интактной коже. Таким образом, проведенные исследования позволяют говорить о том, что одновременная сверх-экспрессия клетками VEGF и FGF2 in vitro изменяет профиль секреции целого ряда цитокинов, хемокинов и факторов роста. Рекомбинантная плазмидная конструкция способна участвовать в индукции ангиогенеза и оказывать выраженное стимулирующее влияние на процессы васкуляризации декомпенсированного кожно-фасциального лоскута, что может быть использовано при лечении длительно незаживающих ран различного генеза.