SRAVNITEL'NYY ANALIZ ZhIZNESPOSOBNOSTI CD34+ KLETOK PUPOVINNOY KROVI POSLE RAZMOROZKI V ZAVISIMOSTI OT SROKA KRIOGENNOGO KhRANENIYa V SISTEME BIOARCHIVE

Abstract

Full Text

В международной медицинской практике ежегодно растет потребность в образцах пуповинной крови (ПК), как для аллогенной трансплантации, так и для регенеративной медицины. Соответственно увеличивается значимость банков ПК, и остро возникает вопрос о качестве заготовленных образцов ПК, о содержании в них стволовых клеток и их жизнеспособности. ЦЕЛЬ. Провести анализ жизнеспособности стволовых гемопоэтических (CD34 + ) клеток ПК в зависимости от срока криогенного хранения, заготовленных Самарским банком пуповинной крови. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. С 2003 г. Самарским банком пуповинной крови заготовлено более 12 500 образцов ПК. Заготовка образцов пуповинной крови проводится после подписания добровольного информированного согласия женщины. Хранение образцов осуществляется в автоматической системе Bioarchive (Thermogenesis, США). Ежегодно проводится валидация процесса обработки и заморозки образцов ПК, заключающаяся в разморозке и подсчете количества и жизнеспособности CD34+ клеток на проточном цитометре FACSCanto (BD, США) .Анализ проводился по данным разморозки 521 образца ПК. Из них 186 образцов со сроком хранения до 100 дней; 188 образцов со сроком от 100 до 500 дней; 108 образцов со сроком от 500 Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине 181 до 1000 дней; 39 образцов со сроком свыше 1000 дней. Все образцы обработаны в соответствии со стандартами международной ассоциации банков гемопоэтических стволовых клеток NetCord. Количество CD34+ в образцах составляло 1,25- 10х106 клеток. Жизнеспособность CD34+ после разморозки составила: до 70% - 41 образец; 70-80% - 85 образцов; 80-90% - 156 образцов; свыше 90% - 239 образцов. Статистический анализ данных выполнялся в среде StatPlus:mac(AnalystSoft,США). Ввиду отсутствия нормального распределения меры центральной тенденции выражали в виде медианы и межквартильного размаха. Для выявления значимых корреляций использовались непараметрический критерий Спирмена и линейный регрессионный анализ. Средний показатель срока хранения образцов составил 151 (62; 551) день.Средний показатель жизнеспособности CD34+ клеток после разморозки, вычисленный без стратификации по сроку хранения, составил 88,8 (80,3;95,7)%. При первичном анализе взаимосвязи показателя жизнеспособности CD34+ клеток и срока хранения получены следующие данные: Spearmen'sRho = -0,28854, p>0,05. При построении линейной регрессионной модели зависимости показателя жизнеспособности CD34+ клеток от срока хранения статистическая значимость коэффициентов полученного уравнения регрессии не была подтверждена. Выявленная при использовании методов дескриптивной статистики значительная гетерогенность изучаемой выборки по основным клинико-технологическим параметрам обосновывает необходимость использования методов многофакторного анализа для результирующей оценки значимых закономерностей. ВЫВОДЫ. Жизнеспособность стволовых гемо-поэтических (CD34+) клеток ПК после разморозки высокая. Отсутствует значимая взаимосвязь показателя жизнеспособности CD34+ клеток после разморозки от срока криогенного хранения.