VYBOR VIRUSNOGO VEKTORA DLYa POLUChENIYa GENETIChESKI-MODIFITsIROVANNYKh MEZENKhIMNYKh STROMAL'NYKh KLETOK ZhIROVOY TKANI, PRODUTsIRUYuShchIKh FAKTOR ROSTA GEPATOTsITOV, DLYa STIMULYaTsII VOSSTANOVLENIYa KROVOSNABZhENIYa I INNERVATsII IShEMIZIROVANNYKh TKANEY

Full Text

Генетическая модификация стволовых/прогени-торных клеток для увеличения продукции факторов роста позволяет значительно повысить эффективность клеточной терапии. Важным аспектом получения генетически-модифицированных клеток является выбор вектора для модификации. Целью данной работы было получение мезенхимных стромальных клеток жировой ткани (МСК ЖТ), гиперпродуцирующих гепатоцитарный фактор роста (HGF), обладающий ангиогенными, антифиброзными и нейро-протекторными свойствами, и выбор оптимального вирусного вектора для их модификации. Мы сравнивали влияние модификации МСК ЖТ человека лен-тивирусом 3 поколения (ЛВ) и аденоассоциирован-ным вирусом второго серотипа (ААВ), несущими ген HGF человека. Было обнаружено, что модификация ЛВ позволяла увеличить экспрессию продукта трансгена в 6 раз больше, чем модификация ААВ. При исследовании влияния генетической модификации на э кспрессионный профиль клеток было обнаружено, что помимо значительного возрастания мРНК HGF как при ААВ, так и при ЛВ трансдукции, наблюдается значительное увеличение мРНК рецептора HGF с-met, рецептора урокиназы - uPAR и фактора роста фибробластов - FGF2 в модифицированных МСК ЖТ. Генетическая модификация МСК ЖТ как ААВ, так и ЛВ независимо от используемого трансгена (HGF или GFP) умеренно снижала пролиферацию этих клеток. Кондиционированная среда МСК ЖТ, модифицированных как ЛВ, так и ААВ с геном HGF, стимулировала ангиогенез в модели образования капилляроподобных структур на Матригеле клетками эндотелия пупочной вены (HUVEC). Однако, в другой модели ангиогенеза - отрастание сосудоподобных струтур от декстрановых бус, покрытых HUVEC - добавление к ним МСК ЖТ, модифицированных ЛВ, как с GFP, так и с HGF , подавляло отрастание микрососудов. В то же время со-культивирование с МСК ЖТ, модифицированных ААВ с геном HGF, оказывало выраженный стимулирующий эффект на отрастание сосудоподобных структур от декстрано-вых бус, увеличивая в 2,5 раза длину формирующихся отростков уже на 3 день со-культивирования и количество отростков по сравнению с эффектом немодифицированных клеток. Полученные результаты позволили нам выбрать для дальнейшей работы Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине 169 модификацию ААВ с HGF, несмотря на то, что экспрессия и секреция HGF были больше при транс-дукции ЛВ. Механизм подавления ангиогенеза при сокультивировании HUVEC с МСК ЖТ, модифицированными ЛВ, будет нами изучен в дальнейших работах. Также наши дальнейшие исследования будут направлены на получение тканеинженерных конструкций в виде клеточных пластов из модифицированных МСК ЖТ для стимуляции ангиогенеза и восстановления нарушенной иннервации ишемизированной задней конечности мыши.

About the authors

I. B Beloglazova

Yu. D Molokotina

Email: yulia.molokotina@mail.ru

E. S Zubkova

E. K Shevchenko

M. A Boldyreva

P. I Makarevich

Yu. S Mtafeev

E. V Parfenova

References

Supplementary files