Immortalizovannye mioblasty -kak instrument dlya IN VITRO modelirovaniya i issledovaniya mekhanizmov razvitiya patologii litse-lopatochno-plechevoy myshechnoy distrofii

Abstract

Full Text

Лице-лопаточно-плечевая мышечная дистрофия (ЛЛПМД или мышечная дистрофия Ландузи -Дежерина) - прогрессирующее аутосомно-доми-нантное заболевание с частотой встречаемости в Европе 1:8000. Наиболее распространенная форма ЛЛПМД (FSHD1) является результатом комбинации трех мутаций на хромосоме 4q35: сокращения количества повторов D4Z4 массива и двух полиморфизмов (4qA161 и 4qA). Такая комбинация приводит к увеличению экспрессии генов DUX4, DUX4c, FRG1, FRG2, ANT1 и др. В процессе развития ЛЛПМД происходит замещение мышечной ткани соединительной и жировой, что, возможно, является следствием нарушения механизма регенерации мышечной ткани. Известно, что миобласты, выделенные от больных доноров, имеют морфологические дефекты при дифференцировке in vitro: образуют тонкие атрофичные миотубулы с линейным распределением ядер или большие миотубулы со случайным распределением ядер, что может быть причиной ослабления мышц у людей с ЛЛПМД. Миобласты имеют ограниченный пролиферативный потенциал, что затрудняет их использование в исследованиях in vitro. Развитие технологий иммортализации позволяет получать бесконечный стандартизованный ре сурс клеток для исследований различных патологий. Получение иммортализованных клеточных линий миобластов с фенотипом ЛЛПМД и их характеристика является актуальной задачей регенеративной биомедицины. ЦЕЛЬ. Охарактеризовать иммортализованные миобласты (ИМ) от больных ЛЛПМД и здоровых доноров и исследовать их влияние на миграцию МСК жировой ткани. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. В работе использовали 4 культуры ИМ: 2 от здоровых (контроль) и 2 от больных ЛЛПМД доноров. Миобласты были им-мортализованы в Институте миологии (Париж) по методу, описанному ранее (ZhuCH, 2007). В качестве контроля использовали культуры первичных миобластов (ПМ) от больных и здоровых доноров, а также ПМ от здорового донора, трансфицированные DUX4. Дифференцировку миобластов проводили по стандартному протоколу, далее оценивали индекс слияния и размер миотубул. Миграцию МСК исследовали в системе Transwell и с использованием клеточного анализатора xCELLigenceDP. Для изучения механизма миграции МСК использовали иммуноцитохимический метод, ПЦР в реальном времени и нейтрализующие антитела к SDF1a. РЕЗУЛЬТАТЫ. Время удвоения клеточной популяции ИМ и ПМ от здоровых и больных доноров значимо не отличалось. При дифференцировке ИМ, как и ПМ от больных доноров образуют дистрофич-ные или гипертрофированные миотубулы. Ранее мы показали, что сверхэкспрессия DUX4 в миобластах стимулирует миграцию МСК (Dmitrievet al., 2016). В этой работе продемонстрировано, что ИМ от доноров с ЛЛПМД также способны стимулировать миграцию МСК за счет секреции SDF1. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Полученные результаты указывают на то, что ИМ от больных ЛЛПМД и здоровых доноров могут быть использованы для исследований клеточных взаимодействий, процессов дифференцировки и регуляторных путей, участвующих в этих процессах, для расширения понимания механизмов развития ЛЛПМД и разработки новых мишеней для терапии.