Vliyanie ekstrakta iz regeneriruyushchey i rastushchey pecheni na toksicheskoe povrezhdenie pecheni IN VIVO i proliferatsiyu gepatotsitov v kul'ture kletok

Abstract

Full Text

В основе патогенеза функционального отказа печени при массивных поражениях лежит недостаточность механизмов репаративной регенерации печени. Ранее было показано, что экстракт из регенерирующей печени крыс способствовал восстановлению поврежденной печени (LaBrecqueD.R., 1975). Мы предположили, что для восстановления поврежденной печени необходима совокупность активных ингредиентов. ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ. Изучение пролиферативной и гепатопротекторной функции экстракта и его фракций, полученных по оригинальной методике из растущей печени модельных животных. МЕТОДЫ. Экстракты из печени неонатального поросенка и печени крыс после ее 70% резекции получали по оригинальной методике, и были названы нами Hepatic Regeneration Set (HRS). Экстракт фракционировали на колонке с сорбентом ToyopearlHW-50S. Действие экстрактов и полученных фракций оценивали на модели токсического повреждения печени мышей тиоацетамидом (ТАА) по изменению активности аспартатаминотрансферазы (АСТ) и ала-нинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке крови. В экстракте из мышиной печени определяли ферментативную активность танкиразы. Использовались культуры Huh7, NIH/3T3, HEK 293 и HeLa. РЕЗУЛЬТАТЫ. Активность АСТ и АЛТ у интактных животных составила 50 и 80 Е/л, соответственно, через 48 ч. после введения ТАА повышалась до 2059±212 и 4280±440 Е/л. У животных, которым помимо ТАА вводили HRS из регенерирующей печени крыс, активность АСТ составила 924±148 Е/л и АЛТ - 1633±308 Е/л, после введения HRS из печени неонатального поросенка - 937±138 Е/л и 1710±237 Е/л. Получены две активные фракции HRS, молекулярной массой 3-60 кДа (фракция 1) и 3-25 кДа (фракция 2а), с удельным индексом восстановления печени 52,1 и 22,6 %/мг (по АСТ) и 45,7 и 17,7%/мг (по АЛТ), по сравнению с удельным индексом восстановления печени экстрактом - 1,8 %/мг (по АСТ) и 2,2 %/мг (по АЛТ). Через 24 ч. после введения HRS активность танкиразы увеличивалась на 95±28% по сравнению с контролем. В отсутствие сыворотки (FBS) HRS способствовал росту культуры гепатоцитов линии Huh7 и стабилизировал первичную культуру ге-патоцитов мыши, эффект являлся дозозависимым. На культуры других клеток экстракт не влиял. Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 120 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине ЗАКЛЮЧЕНИЕ. Экстракты печени неонатального поросенка и регенерирующей печени крысы имеют идентичную гепатопротективную активность. Выделены активные фракции HRS с гепатопротекторным эффектом, в 8-29 раз превышающим эффект экстракта в целом. HRS усиливал активность фермента танкиразы, и в отсутствие FBS поддерживал клеточные культуры гепатоцитарного ряда.