Full Text
Адгезионные взаимодействия являются регулятором жизнеспособности и пролиферативной активности клеток. Существуют два основных типа клеточной адгезии: клетка-клетка и клетка-внекле-точный матрикс (ВКМ). ВКМ - зона трансмиссии, передачи сигналов от регуляторных систем организма к клеткам. Был проведен ряд экспериментов для определения уровня пролиферативной активности первичных популяций мезенхимных стволовых клеток (МСК) костного мозга (КМ) крысы с различным уровнем адгезии к желатину и фибронектину с целью выявления возможных различий. Клетки выделяли из костного мозга взрослых животных по методу Г.Ю. Косовского [
1]. МСК КМ крысы первого пассажа в концентрации 200 000 кл/мл среды DMEM с глутамином (ПанЭко, Россия) с содержанием 10% FBS (HyClone, США) и 100-кратно разбавленного раствора антибиотиков-антимикотиков (Sigma, США) высевали на чашки Петри, покрытые желатином или фибронектином для инкубирования в условиях 5% СО2 в атмосфере и температуре +37°С в течение 10 мин., после чего отбирали среду с не прикрепившимися за это время клетками в чашки Петри с желатином и фибронектином для последующего инкубирования в тех же условиях на протяжении 20 мин. По истечению 20 мин. не адгезировав-шиеся за этот временной промежуток МСК также переносили в соответствующие новые чашки Петри с покрытием соответствующими белками внеклеточного матрикса и оставляли в СО2-инкубаторе еще на 30 мин. Далее, отобранные популяции культивировали в течение 48 ч. в стандартных условиях. Концентрацию клеток подсчитывали в камере Горяева. Время удвоения клеточных популяций определяли по формуле: td = (2 • AT -Хо)/Х, где: АТ - время эксперимента, Хо - исходная концентрация клеток, Х - концентрация клеток через время Т. Из полученных результатов следует, что к желатину за 10 мин. адгезируется 15% МСК КМ крысы, при этом слабо проявляющих пролиферативные свойства (td = 72,6 ч.), тем временем, как клетки, адгезирующиеся к желатину за 30 и 60 мин. (50% прикрепившихся МСК и 35% соответственно), обладают наивысшей скоростью пролиферации (td = 45,4 ч.). При культивировании МСК КМ крысы на фибронектине, адгезирующихся за 10 и 60 мин. (40% и 15% соответственно), среднее время удвоения популяции составляет 58,8 ч., в то время, как клетки, прикрепляющиеся за 30 мин. (45%), обладают низким пролиферативным потенциалом (td = 70,1ч.). Таким образом, показано, что скорость пролиферации первичных популяций МСК КМ крысы связана с адгезивными свойствами, на который также влияет используемый субстрат адгезии. Литература: 1. Косовский Г.Ю. Методические рекомендации по выделению и культивированию мезенхимных стволовых клеток (МСК) из костного мозга животных. Российская академия сельскохозяйственных наук, отделение ветеринарной медицины, Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности. М., 2009, 20 с.
