Novoe sekretiruemoe odnotsepochechnoe antitelo dlya blokirovki svyazyvaniya IL-2 s vysokoaffinnym retseptorom, soderzhashchim sub\"edinitsu IL-2RA (CD25)

Abstract

Full Text

Пересадка органов нередко сопровождается отторжением, которое обусловлено несовпадением набора молекул главного комплекса гистосовместимости (MHC) донора с набором MHC реципиента. Вследствие этого Т-клетки реципиента воспринимают клетки трансплантата как «чужое», активируются и активно пролиферируют, что и приводит к отторжению трансплантата. Активация и пролиферация хелперных и цитотоксических Т-клеток зависит от рецепции цитокина IL-2, который сами Т-клетки и вырабатывают. Рецепция IL-2 осуществляется через тримерный рецептор, одна из субъединиц которого, IL-2R, отвечает за высокоаффинное связывание IL-2. Уровень IL-2R на поверхности активированных Т-клеток повышен для обеспечения сильного сигнала от IL-2, от которого зависит скорость деления и выживание пролиферирующих Т-клеток. Неудивительно, что уровень IL-2 резко возрастает и на ранних стадиях аутоиммунных заболеваний таких как сахарный диабет I-го типа, системная красная волчанка, псориаз, ревматоидный артрит). На сегодняшний день существуют специфические антагонисты IL-2R - полноразмерные моноклональные блокирующие антитела. Препараты на их основе (базиликсимаб и даклизумаб) довольно успешно используют для профилактики отторжения трансплантата и лечения аутоиммунных лимфопролиферативных заболеваний, однако они очень дороги (от 40 000 рублей за инъекцию) и, вследствие нестабильности, требуют многократного введения (минимум 2-3). Мы предлагаем более эффективный генотерапевтический подход, состоящий во введении в организм пациента генетических конструкций, обеспечивающих синтез в клетках и секрецию аналогов антител-блокаторов IL-2R, что позволит снизить стоимость лечения и увеличить продолжительность терапевтического эффекта после однократной инъекции. Цель дан- Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 112 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине ного проекта - дизайн и создание генетической конструкции, кодирующей рекомбинантное антитело, эффективно блокирующее взаимодействие IL-2 с IL-2R. На основе аминокислотной последовательности базиликсимаба мы создали его одноцепочечный аналог (ScFv) состоящий из фрагментов вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей, соединенных между собой линкером. Мы полагаем, что создаваемое ScFv будет эффективно блокировать связывание IL-2 с IL-2R, а за счет меньшего размера легче проникать в ткани (~35 кДа против 143 кДа у базиликсимаба), обладая притом большей стабильностью. Показано, что созданная плазмидная конструкция pVax-antiCD25-scFv после трансфекции обеспечивает высокий уровень продукции antiCD25-scFv в среду культивирования. В настоящий момент проходит оценка эффективности нового антитела in vitro. В случае эффективности pVax-antiCD25-scFv можно будет применить как генно-терапевтический препарат или же в виде генномодифицированных клеток, продуцирующих antiCD25-scFv. Например, с помощью данной конструкции при необходимости можно усилить иммуносупрессивные свойства мультипотентных мезенхимных стромальных клеток. Предложенный подход можно использовать для создания доступных альтернатив дорогим терапевтическим антителам.