PRIMENENIE GENNOMODIFITsIROVANNYKh DERMAL'NYKh FIBROBLASTOV KOZhI DLYa LEChENIYa OZhOGOV 3 STEPENI

Abstract

Full Text

Известно, что лечение дефектов кожи с помощью фибробластов, культивированных in vitro, получило широкое признание в мире. С целью усиления их регенеративных свойств нами были получены и протестированы на животных трансгенные фибробласты кролика с целевой вставкой гена основного фактора роста фибробластов человека FGF-2. Для этого нами были выделены фибробласты из кожи кролика методом эксплантации. В полученные фибробласты с помощью рекомбинантного лентивируса был доставлен ген FGF-2. Эффективность трансдукции составила 78%. У 6 кроликов были смоделированы термические ожоги 3 степени площадью 25 мм2 по методике А. С. Аладышкина. Животные были поделены на 2 группы (контрольная и опытная). После иссечения струпа контрольной группе на место ожога наносили суспензию интактных аллогенных дермальных фибробластов в фибриновом клее Тиссукол в количестве 1 млн, а опытной группе - 1 млн аллогенных генномодифицированных фибробластов по той же методике. Для предупреждения инфицирования применяли антибиотик - 5% раствор байтрила в дозе 0,5 мл, инъекцию делали подкожно в область холки в течение 5 дней. Первые очаги эпителизации появились в обеих группах на 3 день после нанесения фибробластов на рану. Окончательное заживление и образование рубца в контрольной группе было отмечено на 25 день после нанесения фибробластов, в опытной - на 22 день. Согласно гистологическому исследованию образцов кожи, взятых у кроликов на 30 день после нанесения клеточного препарата, у кроликов контрольной группы эпидермис тонкий, прерывистый. Под эпидермисом расположена хорошо развитая рыхлая грануляционная соединительная ткань с большим количеством клеток и волокон, под ней наблюдаются участки дермы с волосяными фолликулами и сальными железами. На препарате виден результат контракционного натяжения. В образцах кожи у кроликов опытной группы эпидермис плотный, состоит из нескольких четко визуализируемых слоев клеток, с хорошим ороговением. Под эпидермисом наблюдаются участки хорошо развитой грануляционной соединительной ткани на поздней стадии репарации, с большим количеством клеток, сальными железами и волосяными фолликулами. Таким образом, несмотря на практически одновременную эпителизацию ран у кроликов в опытной и контрольной группах, гистологическое исследование показало более полное восстановление эпителия у кроликов опытной группы по сравнению с контрольной за одинаковый промежуток времени. Следовательно, применение генномодифицированных дермальных фибробластов стимулирует процессы регенерации при эпителизации ожоговых ран.