Sravnitel'nyy analiz razlichnykh protokolov detsellyulyarizatsii myshechnoy tkani

Abstract

Full Text

Массивные травмы мышечной ткани приводят к необратимому патологическому состоянию - синдрому объемной потери мышечной ткани. Эффективных способов восстановления таких дефектов до сих пор не существует. Одним из перспективных направлений разработок в данной области является создание тканеинженерных конструкций. Основным компонентом тканеинженерной мышцы является каркас, который должен обладать биологическими свойствами, способствующими заселению его клетками и интеграции в реципиентные ткани. Самыми оптимальными свойствами и структурой обладает децеллюляризированная мышечная ткань. Описано множество протоколов получения матриксов естественного происхождения, однако их сравнительная эффективность в равных условиях остается не изученной. В данной работе проведена сравнительная оценка эффективности отмывки мышечной ткани стандартного размера (10x10x5 мм) десятью наиболее часто используемыми по данным литературы протоколами. Дифференциальным морфологическим критерием эффективности децеллюляризации являлось отсутствие ядер и остатков мышечных волокон при гистологическом исследовании микропрепаратов. Полученные результаты свидетельствовали о различной эффективности протоколов в удалении клеток и различной степени нарушения нативной структуры внеклеточного матрикса. На основе полученных данных нами был отработан оптимальный протокол децеллюляризации - обработка мышечной ткани 1% раствором додецилсульфата натрия в течение 72 ч. с последующей инкубацией в тритоне Х-100 в течение 2 ч. Такой метод позволял достичь полного удаления ядерного материала и мышечных волокон, не оказывая при этом влияния на внеклеточный матрикс. Полученные данные свидетельствуют, что на матриксах толщиной более 1-2 мм при агитационном методе децеллюляризации единственным эффективным детергентом является додецилсульфат натрия. Использование такого протокола позволяет получать внеклеточные матриксы, пригодные для создания образцов тканеинженерной мышечной ткани.