Postnatal'nye mul'tipotentnye stvolovye/progenitornye kletki - proizvodnye nervnogo grebnya: translyatsiya v klinicheskuyu praktiku

Full Text

Ряд тканей и органов взрослого человека содержит постнатальные мультипотентные стволовые клетки - производные нервного гребня (МСК-ПНГ). Разработка методов их клинического применения является перспективным направлением в регенеративной медицине. ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Основываясь на позитивных результатах доклинических экспериментов на животных, провести пилотные клинические исследования для оценки безопасности и эффективности использования МСК-ПНГ из волосяных фолликулов (ВФ) или дермы кожи человека для лечения контузионных повреждений спинного мозга (КПСМ), дефектов костей черепа (КЧ) и грыж межпозвонковых дисков (ГМПД). МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ. Все процедуры были выполнены с письменного информированного согласия пациентов и в соответствии с текущим законодательством Украины. МСК-ПНГ были получены из ВФ методом эксплантов, или выделены из дермы кожи и размножены по нашей оригинальной методике. Культивированные МСК-ПНГ были охарактеризованы при помощи ОТ-кПЦР, иммуноцитохимии, проточной цитометрии, цитогенетического анализа и функциональных тестов. Продукция цитокинов и факторов роста была определена при помощи мультиплексного анализа Bio-PlexPro (Bio-Rad). До включения в исследование все пациенты получали нейрореабилитацию, терапевтическое и/или хирургическое лечение по стандартным протоколам, которые оказались неэффективными, либо пациенты имели противопоказания к хирургии. Три пациента с КПСМ получали комбинированные паравертебральные и интратекальные инъекции аутологичных МСК-ПНГ (доза - 20 млн клеток на инъекцию). Десять пациентов с грыжами межпозвонковых дисков получали паравертебральные инъекции МСК-ПНГ в дозе 10 млн клеток на ГМПД. У трех пациентов критические дефекты костей черепа были восстановлены ткане-инженерным костным эквивалентом на основе МСК-ПНГ. Минимальный период наблюдения составляет один год. Результаты. МСК-ПНГ были успешно получены и размножены от всех пациентов. После экспансии МСК-ПНГ сохраняли нормальный кариотип и имели следующий фенотип: Sox2 + Sox1 0 + Nestin + CD73 + CD90 + CD105 + CD140a + CD140b +CD146+CD166+CD271+CD349+CD34-CD45-CD56-HLA-DR-. МСК-ПНГ демонстрируют in vitro следующие свойства: клоногенность, самообновление и способность к мультилинейной дифференциации. МСК-ПНГ продуцируют следующих факторы роста и цитокины: NGF, BDNF, GDNFNT-3, NT-4/5, IL-1 ra, IL-10, bFGF, VEGF и GM-CSF. Два пациента с КПСМ поясничного отдела показали улучшение состояния с ASIAC до ASIAD после клеточной терапии. Пациент с КПСМ грудного отдела - улучшение с ASIAB до ASIAC. У пациентов с ГМПД в результате клеточной терапии исчез болевой синдром и МРТ-признаки миелопатии. Также произошло значительное уменьшение размеров протрузий/экструзий МПД. У трех пациентов успешно восстановлены дефекты КЧ с использованием ткане-инженерного костного эквивалента на основе МСК-ПНГ. ВЫВОДЫ. Пилотные результаты клинического применения МСК-ПНГ показали безопасность и эффективность их применения для лечения КПСМ, грыж МПД и дефектов костей черепа.

About the authors

R. G Vasil'ev

Email: rvasyliev.ilaya@gmail.com

V. F Gritsyk

L. S Litvinova

A. E Rodnichenko

O. S Gubar'

V. V Shupletsova

A. V Zlatskaya

I. M Gordienko

D. A Zubov

References

Supplementary files