Urokinaznaya sistema -proteoliticheskiy regulyator sborki sosudistoy seti pri ko-kul'tivirovanii endotelial'nykh kletok s mezenkhimal'nymi stvolovymi kletkami

Abstract

Full Text

Для получения васкуляризированных тканеинженерных конструкций очень важно понимание клеточных и молекулярных событий, связанных с образованием сети кровеносных сосудов. Известно, что для полноценного заживления поврежденной ткани необходимым условием является быстрое восстановление ее кровоснабжения за счет формирова Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине 41 ния функциональной сосудистой сети, которое происходит при взаимодействии эндотелиальных (ЭК) и муральных клеток (МК). Среди МК особая роль в регуляции ангиогенеза принадлежит мезенхимальным стволовым (стромальным) клетками (МСК), которые локализуются в сосудистом компартменте тканей и органов, принимая активное участие в репарации ткани, прежде всего через регуляцию ангиогенеза и воспалительного и иммунного ответа на повреждение. Целью нашей работы было исследование механизмов, посредством которых МСК могут координировать образование первичной сосудистой сети ЭК. Было обнаружено, что в условиях контактного ко-культивирования на непокрытом пластике, МСК, полученные из жировой ткани, способствуют формированию ЭК (HUVEC) сосудоподобной сети (СПС). Этого не происходит при бесконтактном ко-культивировании этих клеток в трансвеллах с размером пор 4 мкм. Формирование СПС начинается после 14 ч. ко-культивирования ЭК и МСК, что совпадает по времени с синтезом и секрецией внеклеточного матрикса (ВМ) ко-культурой. После 24 ч. в ко-культуре отчетливо видны фибронектиновые фи-ламенты, которые являются основой для сборки ВМ посредством связывания с другими матриксными белками. Однако, без МСК ЭК не образовывали СПС даже при помещении их на ВМ, синтезированный как монокультурами ЭК и МСК, так и ко-культурой в течение 48 ч. В то же время, если МСК культивировали в течение 48 ч., а затем высаживали на них ЭК, то формирование СПС наблюдалось уже через 24 ч. При контактном ко-культивировании ЭК с МСК происходило повышение секреции урокиназы (uPA) и экспрессии ее рецептора (uPAR) на поверхности ЭК, что важно для формирования СПС, так как блокирование uPAR с помощью специфических антител ингибировало этот процесс. Более того, антитела к av-субъединице интегрина также ингибировали образование СПС, что также может свидетельствовать об участии uPAR в данном процессе посредством его взаимодействия с витронектином, который взаимодействует с av-интегриновыми рецепторами. Важное значение для формирования СПС в присутствии МСК имеет также эндоцитоз, поскольку добавление антагониста LRP - RAP, ингибитора внутриклеточного транспорта белков - монензина или ингибитора полимеризации микротрубочек колхицина - тормозили этот процесс. Антитела к ингибитору урокиназы PAI-1 также подавляли формирование СПС. Полученные результаты, свидетельствующие о важности прямых контактов между ЭК и МСК для формирования сосудистой сети и роли урокиназной системы в этом процессе, могут иметь значение для разработки технологий получения васкуляризированных тканеинженерных конструкций.