FENOMEN PLASTIChNOSTI V POLUChENII INSULIN-PRODUTsIRUYuShchIKh KLETOK DLYa KORREKTsII INSULIN-ZAVISIMOGO DIABETA

Abstract

Full Text

Определение границ пластичности различных типов клеток является одной из актуальных задач современной науки. Проведенный анализ экспрессии генов культуры протоковых клеток поднижнечелюстной слюнной железы мыши выявил значительную фенотипическую конвергенцию данных клеток с клетками энтодермы, что позволяет предположить, что поднижнечелюстные слюнные железы могут быть использованы как источник клеток для заместительной клеточной терапии органов энтодермального происхождения. Целью данной работы являлось исследование пластичности клеток поднижнечелюстных слюнных желез (КСЖ) мыши и человека. В результате были разработаны методики культивирования и дифференцировки данных клеток, которые в дальнейшем были исследованы с помощью методов проточной цитометрии, иммуноцитохимии, а также иммуноферментного анализа и ПЦР-РВ. Данные, полученные с помощью ПЦР-РВ анализа, показали рост экспрессии генов транскрипционных факторов, влияющих на формирование эндокринных клеток поджелудочной железы в эмбриогенезе. Анализ экспрессии генов, характерных для различных типов клеток поджелудочной железы, показал, что дифференцировка преимущественно проходит в сторону образования ß-подобных клеток. Было продемонстрировано, что использование культивирования в трехмерных условиях повышает эффективность дифференцировки КСЖ человека. С помощью иммуноферментного анализа было получено подтверждение глюкозозависимой секреции инсулина, что говорит о приближении фенотипа исследуемых клеток к эндокринным клеткам поджелудочной железы. С помощью экспериментальных моделей было выяснено, что при введении продукта внутрибрюшинно клетки имеют тропность к поджелудочной железе. На модели экспериментального диабета показано, что после Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине 7 трансплантации суспензии клеток поднижнечелюстной слюнной железы происходит восстановление количества и общей площади островков Лангерганса и приближение этих параметров к таковым у здоровых животных. На моделях с использованием иммунодефицитных животных было показано, что в течение как минимум трех месяцев после подкожной инъекции суспензии клеток поднижнечелюстной слюнной железы человека не наблюдалось смертности и признаков формирования опухолей. Кроме того, иммуногистохимические и гистологические исследования показывают отсутствие воспалительной реакции у мышей в месте трансплантации. Таким образом, клетки поднижнечелюстной слюнной железы демонстрируют возможности к трансдифференцировке в энтодермальном направлении и высокий уровень клеточной пластичности.