Induktsiya reguoyatornykh T-kletok s pomoshch'yu dendritnykh kletok, transfitsirovannykh IL-10

详细

全文:

Одним из перспективных экспериментальных подходов в клеточной терапии трансплантационных реакций, таких как реакция отторжения и реакция трансплантат против хозяина, считается применение толерогенных дендритных клеток (ДК) и получаемых с их помощью Treg и Tr1 клеток. В данной работе для получения FoxP3+ Treg клеток и IL-10+ Tr1 с целью разработки экспериментального подхода для угнетения трансплантационных реакций использовали ДК, трансфицированные ДНК-конструкцией, кодирующей IL-10 Толерогенные ДК получали из костного мозга мышей C57Bl/6 в присутствии GM-CSF и IL-4 в течение 3 дней. Для стабилизации толерогенных свойств и усиления толерогенной функции ДК трансфицировали методом электропорации плазмидной ДНК-конструкцией, кодирующей IL-10. Полученные дендритные клетки проверяли на способность к индукции FoxP3+ Treg и IL-10+ Tr1 клеток при сокультивировании с аутологичными спленоцитами. Дендритные клетки, полученные из костного мозга мышей C57Bl/6 в присутствии GM-CSF и IL-4 по 3х дневному протоколу, согласно экспрессии H2-b, CD80 и CD86, обладали незрелым фенотипом. Далее ДК трансфицировали методом электропорации ДНК-конструкцией, кодирующей IL-10. Эффективность электропорации была проверена методом ИФА, с помощью которого было показано, что при увеличении количества плазмидной ДНК, используемой для трансфекции увеличивалось и количество IL-10 в кондиционных средах от трансфицированных ДК. Таким образом, трансфекция ДК методом элеткропорации протекала успешно. ДК, подвергнутые электропорации, согласно экспрессии Cd80, cD86, CD83 и СD40 обладали более зрелым фенотипом по сравнению с неэлектропорированными клетками. При этом электропорация ДК именно IL-10 несколько снижала эффект созревания по сравнению с электропорацией контрольной плазмидой. ДК, трансфицированные ДНК-конструкцией, кодирующей IL-10, были способны увеличивать относительное количество FoxP3+ Treg и IL-10+ Tr1 клеток в культурах аутологичных спленоцитов, по сравнению со спленоци-тами, нестимулированными ДК и по сравнению со спле-ноцитами, стимулированными ДК, трансфицированными контрольной плазмидой, что говорило о их способности выполнять толерогенную функцию. Таким образом, ДК, трансфицированные ДНК-конструкцией, кодирующей IL-10, приводят к индукции Treg и Tr1 клеток и могут быть рекомендованы для дальнейших in vivo экспериментов с целью разработки подходов угнетения трансплантационных реакций.