THE ROLE OF TAT-PROTEIN IN APOPTOSIS PROTECTION OF RPMI8866 B-LYMPHOCYTES

详细

全文:

В-зрелоклеточные лимфомы могут развиваться как побочное заболевание при ВИЧ и являются частой причиной смерти ВИЧ-инфицированных пациентов. Предполагаемым ВИЧ-ассоциированным индуктором онкогенеза является вирусный (14 кДе) Tat-белок (trans-activator of transcription): некоторые данные указывают на его способность вызывать гиперэкспрессию генов антиапоптотических белков, однако это свойство никогда не ассоциировалось с В-клеточным лимфомагенезом. В данной работе для культуры В-лимфоцитов RPMI8866-Tat-GFP (с постоянной экспрессией Tat) была показана гиперэкспрессия транскрипционного фактора NFkB (IKKalpha/beta, p65, NFkB1/2), одного из универсальных сигнальных эффекторов, обеспечивающих выживание В-клеток, по сравнению с исходной культурой RPMI8866. Для данных клеточных линий была описана модель одновременного анализа клеточного цикла и апоптоза под действием классических митостатиков (ингибиторов микротрубочек с разным механизмом действия: па-клитаксела, винорельбина и нокодазола). Было показано, что митостатический ответ клеток является нелинейным (существуют пороговые концентрации митостатиков, обеспечивающие эффективное накопление клеток в фазе G2/M) и одинаковым для обеих клеточных линий. Пороговые концентрации составили 10 нМ для паклитаксела и винорельбина и 100 нМ для нокодазола. Арестованные в G2/M-фазе клетки при этом погибали апоптозом. Однако, начиная с пороговой митостатической и до максимальной использованной (1000 нМ) концентрации каждого из веществ, процент апоптотических клеток возрастал линейно и был достоверно меньше в клетках RPMI8866-Tat-GFP по сравнению с RPMI8866 (p<0.05) вне зависимости от концентрации веществ и способа оценки процента апоптотических клеток. Полученные данные позволяют предположить несколько путей индукции апоптоза при воздействии ингибиторов микротрубочек, связанных и несвязанных с митотическим арестом, а также роль Tat-белка в защите от апоптоза через повышение уровня NFkB в В-лимфоцитах.