Monoklonal'nye antitela protiv endoglina zamedlyayut migratsiyu kletok endoteliya IN VITRO

详细

全文:

Эндоглин (CD105) представляет трансмембранный гликопротеин, который входит в состав рецепторных комплексов, распознающих ростовые факторы TGF-ß1 и -ß3. Эндоглин участвует в регуляции адгезии, миграции и пролиферации эндотелиальных клеток. Металлопротеиназа MMP14 способна отщеплять экстраклеточный фрагмент эндоглина с образованием растворимой формы белка, который обладает антиангиогенными свойствами. В лаборатории гибридомной технологии РНЦРХТ создана панель моноклональных антител, распознающих разные эпитопы эндоглина (Смирнов и др., 2015). Задачей работы было изучение эффекта моноклональных антител на миграцию клеток эндотелия EA.hy926 в тесте закрытия «раны» клеточного монослоя. Целостность монослоя клеток нарушали с помощью наконечника пипетки, после чего клетки культивировали в присутствии моноклональных антител (5 мкг/мл) в течение 24 ч. В контроле использовали моноклональные антитела того же изотипа, не распознающие эндоглин. Также исследовали эффект антител на клетки в присутствии рекомбинантного TGFß1 (1 нг/мл). Клетки фотографировали с помощью инвертированного микроскопа (AxioZeiss) непосредственно после нанесения «раны» и через 24 ч. Площадь «раны» определяли с использованием программного обеспечения, основанного на пакете EBImage (https://www.bioconductor.org/). Нанесение «раны» приводило к увеличению образования растворимого эндоглина клетками эндотелия. Присутствие моноклональных антител к эндоглину замедляло процесс закрытия «раны» по сравнению с контролем. Ростовой фактор TGFß1 ускорял процесс уменьшения площади «раны». Присутствие антител к эндоглину нивелировало стимулирующий эффект TGFß1. Ингибирующее действие на миграцию клеток эндотелия было показано для четырех моноклональных антител, распознающих разные эпитопы эндоглина. Таким образом, связывание моноклональных антител с эндоглином вызывает замедление миграции интактных и стимулированных TGFß1 эндотелиальных клеток EA.hy926.