Vliyanie vitrifikatsii na morfologiyu i zhiznesposobnost' ootsitov mlekopitayushchikh

Resumo

Texto integral

Успех оплодотворения криоконсервированных ооци-тов млекопитающих, в частности человека, во многом зависит как от используемых в средах криопротекторов, так и от выбранного способа заморозки. На сегодняшний день наиболее простым и эффективным методом криоконсервации ооцитов признан метод витрифика-ции. И так как результаты получения эмбрионов in vitro и их последующей трансплантации напрямую зависят от качества размороженных яйцеклеток (ЯК) - изучение влияния витрификации на морфологию и жизнеспособность ооцитов млекопитающих актуально как для животноводства, так и для репродуктивной медицины. В качестве модели использовались ооциты коров: из-за особенностей строения они наиболее близки по свойствам к человеческим. Это важно, особенно при переносе протокола витрификации с животной модели на ооциты человека. Витрификация осуществлялась путем последовательной инкубации ЯК, извлеченных из яичников 8 коров при помощи аспирации антральных и преовуляторных фолликулов, в средах с разной концентрацией DMS0 и EG в несколько этапов с последующим замораживанием. После хранения в жидком азоте опытные образцы были разморожены в растворах сахарозы. Для оценки жизнеспособности ооцитов был проведен морфологический анализ и флуоресцентная микроскопия (красители - CAM и Hoechst). В результате аспирации яичников было получено 97 яйцеклеток коров разной степени зрелости от GV до MII. Для витрификации были отобраны ооциты, окруженные клетками кумулюса, хорошего качества. После длительного хранения (1 2 месяцев) было разморожено 46 ооцитов. Анализ морфологии ЯК после оттаивания с последующим включением флуоресцентного красителя CAM показал, что 38 из 46 (82.6%) ооцитов имели нормальную морфологию, а остальные 1 8,4% (8/46) имели дегенеративные структурные изменения. Ядра клеток кумулюса хорошо прокрасились Hoechst и визуализировались под флуоресцентным микроскопом. Выводы. Таким образом, метод витрификации и разработанный в результате данного исследования протокол мгновенного замораживания могут быть успешно применены не только в сельском хозяйстве и животноводстве, но и в репродуктивной медицине: перенос данной технологии витрификации с животной модели - с ооцитов коров - на замораживание ооцитов человека.