KUL'TIVIROVANIE TKANI YaIChNIKOV - NOVAYa VOZMOZhNOST' SOKhRANENIYa FERTIL'NOSTI PRI NEDOSTATOChNOSTI YaIChNIKOV

Resumo

Texto integral

КУЛЬТИВИРОВАНИЕ ткани яичников -новая возможность СОХРАНЕНИЯ фертильности при недостаточности яичников Проблема сохранения фертильности пациенток с преждевременной недостаточностью яичников (ПНЯ) вследствие лечения онкологических заболеваний, оперативных вмешательств на яичниках, аутоиммунного воздействия или генетической пред Гены & Клетки Том XII, № 3, 2017 материалы III национального конгресса по регенеративной медицине 21 расположенности весьма актуальна из-за возрастающего количества таких пациенток. В большинстве случаев сохранить свою репродуктивную функцию эти женщины могут с помощью методов ВРТ: криоконсервации ооцитов, эмбрионов, овариальной ткани. Выбор оптимальной стратегии индивидуален и зависит от множества факторов. Нами была проведена экспериментальная работа - культивирование ткани яичников in vitro - в условиях, в которых примордиальные фолликулы развивались и сохраняли свою жизнеспособность. В исследовании принимали участие 4 пациентки в возрасте от 18 до 40 лет со сниженным овариальным резервом различного генеза. При гистологическом исследовании кортикальный слой биоптатов яичников пациенток содержал кистозно-атрезирующиеся фолликулы, преантральные и антральные фолликулы обнаружены не были. Фрагменты овариальной ткани доставляли в лабораторию в день оперативного вмешательства в течение 2-3-х ч. в фосфатно-солевом буфере, измельчали скальпелем и выращивали на протяжении 34 дней в полной питательной среде RPMI-1640 с 10% FCS, эпидермальным фактором роста (EGF) и гормонами (инсулин, ФСГ). Каждый день проводили микроскопический анализ морфологии ткани яичников. Каждую неделю несколько фрагментов овариальной ткани подвергали окраске флуоресцентными красителями (PI, CAM, AlexaFluor 488 Annexin) для оценки жизнеспособности клеток и наличия апоптоза. Морфологический анализ показал наличие в образцах клеток гранулезы, фибробластов, атретических фолликулов в толще овариальной ткани. Со временем фибробласты сформировали монослой в некоторых лунках, клетки гранулезы в суспензии с 5-7 дня начинали активно пролиферировать, к 21 дню 20-30% клеток окрашивались на апоптоз, а к 34 дню процент мертвых клеток составил около 60%. На 10-14 дни культивирования были обнаружены фолликулы с антральной полостью или без неё. К 28 дню в лунках наблюдалось формирование отдельных фолликуло-подобных структур. Флуоресцентная микроскопия измельченных фрагментов ткани яичников показала хорошую выживаемость стромальных элементов на протяжении всего периода культивирования. При добавлении EGF и ФСГ сохранялись мелкие сосудистые образования. Показано, что жизнеспособность клеток ткани яичников при данных условиях культивирования сохраняется на протяжении 34 дней. Нами были получены фолликулы ранних стадий развития (преантральные и ранние антральные). Однако получить фолликулы, содержащие зрелые ооциты, не удалось. Требуются дополнительные исследования для выявления факторов, оказывающих воздействие на созревание примордиальных фолликулов у пациенток с ПНЯ.