Razrabotka metoda vizualizatsii progenitornykh kletok epikarda posle infarkta

Аннотация

Толық мәтін

Многочисленные исследования указывают на значимую роль эпикарда в формировании клеток-предше-ственниц и митогенных сигналов, контролирующих развитие и репарацию сердца, что делает его потенциальной мишенью для терапевтического воздействия. Однако идентификация прогениторных клеток эпикарда (ПКЭ) и изучение механизмов их активации крайне затруднены в связи с анатомическими особенностями расположения сердца и необходимостью использования соответствующих трансгенных животных. В связи с этим разработка метода визуализации ПКЭ является актуальной задачей. Цель исследования: разработать метод визуализации прогениторных клеток эпикарда. Методы. В работе использованы мыши линии C57Bl6. Для визуализации клеток эпикарда в полость перикарда вводили 20 мкл красителя PKH26, инкубировали 5 мин., затем удаляли перикард с помощью операционных ножниц. Инфаркт миокарда моделировали путем перевязки передней нисходящей коронарной артерии. Визуализацию маркеров ПКЭ проводили на криосрезах с использованием метода иммунофлуо-ресцентного окрашивания. Результаты. Показано, что введение в полость перикарда флуоресцентного красителя PKH26 с последующей кратковременной инкубацией и снятием перикарда способствует внесению флуоресцентной метки в эпикардиальный слой клеток. В неповрежденном миокарде PKH26+ клетки эпикарда сохраняют жизнеспособность, межклеточное взаимодействие на основе плотных контактов (E-кадгерин, Z01) и низкий уровень пролиферации. После инфаркта миокарда происходит «разобщение» эпикардиального слоя клеток, утолщение субэпикардиальной области, содержащей пролиферирующие PKH26+ клетки. Часть меченных ПКЭ мигрируют в нижележащие слои миокарда и экспрессируют маркеры гладкомышечных клеток и фибробластов. Таким образом, введение флуоресцентного красителя PKH26 в полость перикарда позволяет визуализировать клетки эпикарда и их производные как в отсутствии повреждения, так и после инфаркта, что может быть использовано для изучения их функций и разработки терапевтических средств таргетного воздействия на эпикард.